培养细胞的免疫酶标抗体染色法

培养细胞的免疫酶标抗体染色法

 

    免疫酶组织化学技术是以酶作为抗原抗体反应的标记物，酶催化相应的  底物，形成一种不溶性的反应产物。光镜观察时，要求形成的终产物为不溶性的有色沉淀，  而电镜观察时，则要求酶反应的终产物经适当处理后，具有较高的电子密度。辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)是目前应用最多的酶标记物，具有稳定性强和酶反应特异性高等优点。

   

    1)0．1mol／LPB(pH 7．2)配制的4％多聚甲醛原位固定(4℃)1小时；

    2)2％H2O2／甲醇处理(可省略)，室温20分钟，封闭内源性过氧化物酶活性；

    3)PBS漂洗后1％BSA室温孵育15分钟；

    4)特异性抗体(第一抗体)室温孵育3小时或4℃孵育过夜；

    5)PBS充分漂洗后，HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30―60分钟，如系生物素标记的第二抗体 ，反应后则需进一步按ABC试剂盒要求操作；

    6)PBS漂洗后，1％戊二醛0．1m01／LPB配制固定30―60分钟，PBS漂洗；

    7)呈色反应：0．03％～0．05％DAB 0．0l％H>(L／0．05mol／LTris―HCl(pH 7．6)显色，适时终止反应，PBS漂洗；

    8)1％OsO₄ 后固定30～60分钟；

    9)样品的脱水、原位包埋、超薄切片制作及电镜观察等与常规电镜相同。

培养细胞的免疫酶标抗体染色法电镜图

显示胸腺细胞表面：thy1.2抗原分布（箭头所示）

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