组织切片的免疫酶标抗体染色法
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组织切片的免疫酶标抗体染色法
1)4%多聚甲醛固定的组织置15%~20%蔗糖PBS中漂洗,4℃过夜或组织块下沉至 杯底;
2)制作30~40um厚的振动切片或冰冻切片,PBS漂洗;
3)2%H2O2甲醇处理,室温20分钟,封闭内源性过氧化物酶活性;
4)1%BSA室温孵育15分钟;
5)第一抗体4℃孵育12~24小时,PBS漂洗;
6)HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30―60分钟,如系生物素标记的第二抗体,反应后则需进一步按ABC法要求操作;
7)呈色反应:0.03%~0.05%DAB 0.01%H2O2/0.05m01/L Tris―HCl(pH 7.6)显色,适时终止反应,PBS漂洗;
8)1%戊二醛0.1mol/L PB配制固定15~30分钟(4℃),P13S充分漂洗;
9)样品的锇酸后固定、脱水、包埋、超薄切片制作及电镜观察等处理与常规电镜相同。
组织切片的免疫酶标抗体染色法电镜图
环氧树脂包埋前免疫酶染色示大鼠脊髓背角浅层内P物质在轱突终夫中的分布,箭头示高电子密度的免疫反应产物(A1,标记的轴突终末;A2,未标记的轴突终末;D,树突