检测细胞凋亡时，PI染色法的染色剂制备过程是什么，与AO染色法相比有什么优点？

这两个方法都可以，看你们实验室有那种就用那种呗，一般用PI的多，是因为PI只能染死细胞，正常细胞不能着色

吖啶橙(Acridine Orange，AO)为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。
在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

过程

制备活细胞悬液106 /ml；

取95μl细胞悬液，加5μl的AO染液混合、避光作用10min；

加入5ml PBS，1500r/min离心5min，弃上清，重复洗涤2次；

重悬细胞，吸一滴滴于玻片上并用盖玻片封片；

【结果判断】

在荧光显微镜下，选用515nm激发光镜检：AO染色细胞DNA呈黄色或黄绿色。当细胞凋亡时，染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎片。

PI染色法和AO染色法也可运用于石蜡切片、冰冻切片及细胞涂片的染色，方法如下：

常规石蜡切片经脱蜡、水化后（按石蜡切片HE染色的脱蜡方法），用PBS洗5min。

或冰冻切片经冷丙酮固定15min后，吹干，PBS洗5min。

或细胞学涂片用4％多聚甲醛固定30min后，PBS洗5min。

将玻片浸入盛有PI或AO染液的染色缸，室温下避光染色，作用30min。

PBS洗涤后，用盖玻片封片；

在荧光显微镜下，选用大于536nm或515nm的激发光观察结果：

PI染色将凋亡细胞胞核染色呈红色荧光。

AO染色将凋亡细胞胞核染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎

PI（碘化丙啶）标记死细胞核酸发红色荧光，根据活死细胞荧光不同直接排除杂质碎片的干扰，弥补了台盼蓝的不足。

PI无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。能够更好区分凋亡时期。