丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通
点赞
收藏
wx-share
分享

AO染色法(丫啶橙染色法)检测细胞凋亡

互联网

14392
AO 染色法(丫啶橙染色法)检测细胞凋亡

【材料与试剂】

pH4.8~6.0 Tritionx-100的PBS缓冲液,

AO染料:将AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中,终浓度为6μg/ml,含Rnase100μg/ml,避光保存。

荧光显微镜

【操作方法】

制备活细胞悬液106 /ml;

取95μl细胞悬液,加5μl的AO染液混合、避光作用10min;

加入5ml PBS,1500r/min离心5min,弃上清,重复洗涤2次;

重悬细胞,吸一滴滴于玻片上并用盖玻片封片;

【结果判断】

在荧光显微镜下,选用515nm激发光镜检:AO染色细胞DNA呈黄色或黄绿色。当细胞凋亡时,染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎片。

【附注】PI染色法和AO染色法也可运用于石蜡切片、冰冻切片及细胞涂片的染色,方法如下:

常规石蜡切片经脱蜡、水化后(按石蜡切片HE染色的脱蜡方法),用PBS洗5min。

或冰冻切片经冷丙酮固定15min后,吹干,PBS洗5min。

或细胞学涂片用4%多聚甲醛固定30min后,PBS洗5min。

将玻片浸入盛有PI或AO染液的染色缸,室温下避光染色,作用30min。

PBS洗涤后,用盖玻片封片;

在荧光显微镜下,选用大于536nm或515nm的激发光观察结果:

PI染色将凋亡细胞胞核染色呈红色荧光。

AO染色将凋亡细胞胞核染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序