怎样利用PI单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡？

收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL｝，500~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。3ml PBS洗涤1次。离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。离心弃去固定液，3mlPBS重悬5min。400目的筛网过滤1次，500—1000r/min离心5min，弃去PBS。用1ml PI染液染色，4℃避光30min。流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。

在以PI荧光强度（代表DNA量）为横坐标的柱状图上，一般会有2个峰，G1和G2，G1就是正常细胞，G2是正在分裂的2倍体。2者间是S期细胞。如果有凋亡的细胞，在G1前会有细胞出现，就是DNA含量少于正常细胞的凋亡细胞。

这个方法看凋亡，主要是看sub-G1期的细胞数量。原理就是凋亡的细胞，由于DNA正在降解，所以含量比正常细胞要少。