酶标抗体的鉴定
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1．酶标抗体的活性鉴定 一般以 琼脂 扩散和免疫电泳进行鉴定。使酶标抗体和相应的抗原(抗原浓度为1mg/ml)产生沉淀线,洗涤后于底物溶液中显色,显色后用生理盐水漂洗,沉淀线不褪色,说明酶和抗体都具有活性。良好的酶标结合物 琼脂 扩散滴度一般应在1：16以上。
2．酶结合物的定量测定 包括酶量、IgG含量、酶与IgG克分子比值以及结合率的测定。
酶量(µg/ml)=OD 403nm ×0.42
（1）戊二醛法：IgG(mg/ml)=(OD 280nm －OD 403nm ×0.42)×0.94×0.62
(OD 403 ×0.42为酶在403nm的光密度， 抗体 与酶－戊二醛结合后OD 280nm 约增加6%，所以乘以0.94校正。由于兔IgGOD 280nm =1.0时为0.62mg，所以又乘以0.62)。
（2）过碘酸钠法：IgG(mg/ml)=(OD 280 －OD 403 ×0.30)×0.62
(3)克分子比值=(酶ug/m) /40000/[(IgG mg/ml) / 160 000]=酶X4 /IgG
(40 000和160 000分别为辣根过氧化物酶和IgG的分子量)。
⑷ 酶结合率=结合物中的酶量/标记时加入的酶量×100%。
⑸ 酶标记率：OD 403nm /OD 280nm 即酶中正铁血红素辅基的吸光度(403nm)与 抗体 －酶蛋白中的色氨酸、酪氨酸的吸光度(280nm)之比表示HRP在Ab E 中所占的比例，它与E/Ab克分子比值呈高度正相关。
3．酶结合物的质量标准 纯化的酶结合物的质量标准应包括以下几个方面。
（1）酶的催化活性。
（2）免疫学活性。
（3）未联接的游离酶的量。
（4）未联接的原始免疫反应物的量。
（5）每个酶分子所联接的免疫反应物分子数目。
（6）生化性质。
（7）酶标记免疫试验效果。
酶结合物的质量差异,可引起试验敏感度的很大变化。例如用不同的程序制得的HRP－IgG结合物进行酶标记免疫试验，可得到不同的试验结果，故应予重视。
用于ELISA酶标抗体的各项指标参数
|
评价 |
最好 |
好 |
一般 |
|
酶结合量(mg/ml) |
≥1.0 |
≥0.5 |
0.4 |
|
酶结合率(%) |
＞30 |
9～10 |
7 |
|
酶IgG克分子比 |
＞1.5 |
1.0 |
0.7 |
