原理
细胞骨架微管的主要成分主要为管蛋白（Tublin），用免疫荧光法能显出其清晰结构。
材料与仪器
细胞
PBS 丙酮 甲醛
碟皿 恒温箱
PBS 丙酮 甲醛
碟皿 恒温箱
步骤
1. 细胞培养
用支持物细胞培养法，把细胞培养在小盖片上；
2. 漂洗
用镊子挟出小盖片，在温PBS中漂洗3 次，每次30 秒；
3. 固定
在室温中用PBS配的3 %甲醛液固定20 分钟；
4. 漂洗
从固定液中取出，仍用温PBS漂洗3 次，每次1 分钟，最后在滤纸上吸干多余的PBS；
5. 过丙酮
投入冷丙酮中（－10 ℃～－20 ℃），令细胞面向上，作用7 分钟；
6. 漂洗：
同4；
7. 抗体处理
取一直径6 厘米干净的碟皿，向皿中央滴1 滴浓度为0.1～0.2 mg/ml的一级抗管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，置37 ℃温箱中45 分至1 小时（内有水盒以避免抗体液蒸发干掉）；
8. 漂洗
向碟皿内徐徐滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子挟出，按4处理；
9. 二级荧光抗体处理
按7进行（荧光抗体常用羊抗兔抗体）；
10. 漂洗
按8和4处理，封片；取一大载物片，用滤纸剪一纸框置于载物片上向纸框中滴甘油/PBS（pH8.5，PBS 1 分加甘油9 分）少许，把小盖片置入框中再覆以大盖片；置荧光显微镜下观察。
用支持物细胞培养法，把细胞培养在小盖片上；
2. 漂洗
用镊子挟出小盖片，在温PBS中漂洗3 次，每次30 秒；
3. 固定
在室温中用PBS配的3 %甲醛液固定20 分钟；
4. 漂洗
从固定液中取出，仍用温PBS漂洗3 次，每次1 分钟，最后在滤纸上吸干多余的PBS；
5. 过丙酮
投入冷丙酮中（－10 ℃～－20 ℃），令细胞面向上，作用7 分钟；
6. 漂洗：
同4；
7. 抗体处理
取一直径6 厘米干净的碟皿，向皿中央滴1 滴浓度为0.1～0.2 mg/ml的一级抗管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，置37 ℃温箱中45 分至1 小时（内有水盒以避免抗体液蒸发干掉）；
8. 漂洗
向碟皿内徐徐滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子挟出，按4处理；
9. 二级荧光抗体处理
按7进行（荧光抗体常用羊抗兔抗体）；
10. 漂洗
按8和4处理，封片；取一大载物片，用滤纸剪一纸框置于载物片上向纸框中滴甘油/PBS（pH8.5，PBS 1 分加甘油9 分）少许，把小盖片置入框中再覆以大盖片；置荧光显微镜下观察。
注意事项
荧光抗体有市售品，如无，也可参阅免疫学技术自制。
来源：丁香实验
