简介
反转录 PCR 测定 IFN-γ 细胞因子方法是利用 RT PCR 技术检测 IFN-γ 细胞因子的一种方法。
材料与仪器
器材：
rtPCR 仪、电泳仪等
试剂：
① RNA 提取试剂盒
② 反转录试剂盒
③ 琼脂糖凝胶和 1 × TAE
步骤
反转录 PCR 测定 IFN-γ 细胞因子方法的基本流程如下：
（1）将用前述方法建立的抗原特异性 CD4＋T 细胞克隆、刺激后 PBMC 或刺激后 CD4＋T 细胞铺于 96 孔细胞培养板，每组设 3 复孔。按 1：2～10：1 的比例加入用上述方法制备的 APC。共培养 18～24 小时后，收集细胞。
（2）提取细胞总 RNA，反转录 RNA 为 cDNA。cDNA 稀释后，取一定体积的稀释后 cDNA，采用 PCR 法扩增 IFN-γ 特异性片段。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，转膜，采用 Southern 杂交（Southernblotting）法进行半定量检测。
（3）或以稀释后 cDNA 为模板，用 real time PCR 进行定量检测。
来源：丁香实验
