亲和层析纯化MHC II类分子测定多肽亲和力

器材：

抗体-Sepharose CL-4B 亲和层析柱、蛋白 A-Sepharose 柱

试剂：

① 抗 MHC II 类分子单克隆抗体

② 10 mmol/L Tris-HCI PBS（pH8.0，含 1% NP-40）

③ 含 0.4% n-octylglucoside 的 PBS

④ 含 50 mmol/L 二乙胺、0.4% n-octylglucoside 的 0.15 mol/L NaCl（pH11.5）

⑤ 2.0 mol/L Tris（pH6.8）

亲和层析纯化 MHC II 类分子测定多肽亲和力方法的基本流程如下：

（1）将抗 MHC II 类分子单克隆抗体连接到琼脂糖凝胶 CL-4B（Sepharose CL-4B）上，装柱，制成抗体-Sepharose CL-4B 亲和层析柱。

（2）裂解后的细胞溶液过未活化的 SepharoseCL4-B 柱和蛋白 A-Sepharose 柱 2 次后，过抗体-Sepharose CL-4B 亲和层析柱。用 10 个柱体积的 10 mmol/L Tris-HCI PBS（pH8.0，含 1% NP-40）、2 个柱体积的 PBS 和 2 个柱体积的含 0.4% n-octylglucoside 的 PBS 洗柱。

（3）用含 50 mmol/L 二乙胺、0.4% n-octylglucoside 的 0.15 mol/L NaCl（pH11.5）将 MHC II 类分子从柱上洗脱下来。收集洗脱液，加入 1/25 体积的 2.0 mol/LTris（pH6.8），使洗脱液的 pH 降至 8.0。

（4）浓缩洗脱液。