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噻唑蓝比色法检测细胞增殖

相关实验:细胞增殖检测实验

最新修订时间:

简介

MTT,化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名为噻唑蓝。


该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选以及肿瘤放射敏感性测定等,但不适用于 CTL 等的检测。


它的特点是灵敏度高、经济。缺点:由于 MTT 经还原所产生的甲臜产物不溶于水,需溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲臜的有机溶剂对实验者也有损害。


近年来,XTT、MTS、WST-1 等修饰后的四氮唑盐产品已经问世,这些产品的主要优点是活细胞掺入该物质后可以形成水溶性的甲臜,无需特定的溶解液来溶解,可以省去后续的溶解步骤。

材料与仪器

器材:微量振荡器、酶标仪等。

试剂:

① MTT 工作液;


步骤

噻唑蓝比色法检测细胞增殖的基本过程可分为如下几步:

1. 实验终止培养前 4 小时每实验孔中加入 10μl MTT。

2. 1000 r/min 离心 5 分钟,小心吸弃培养上清,加入 100 μl/孔 DMSO,微量振荡器上缓慢作用 10 分钟。

3. 在酶标仪于 570nm 处测光吸收值(A)。

4. 结果判定 将丝裂原刺激组和对照组各自的 A 值,代入下列公式计算刺激指数(SI)。



注意事项

三种四氮唑盐的检测方法比较见表16-1


来源:丁香实验

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