HRP/AP 双酶双底物的双重免疫染色（间接法）——淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记

1. 石蜡切片常规脱蜡至水（若用含汞固定液固定的组织，则需用内含 0.5％ 碘的乙醇溶液脱汞 5 min，乙醇浓度为 70％，经自来水洗后以 2.5％ 硫代硫酸钠浸洗 1 min，水洗）。

2. 0.3％H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min，自来水洗，蒸馏水洗，入 PBS（0.01mol/L，pH 7.2）洗。

3. 滴加正常羊血清 1:10，湿盒，室温，10 min，不洗。

4. 加一抗（抗人κPcAb 与抗人 McAb 的混合液）1:200，湿盒，37℃，45 min 或更长。

5. PBS 洗 5 min×3。

6. 加二抗（GARG+GAMG 混合液 1:200），湿盒，37℃，30 min。

7. PBS 洗 5 min×3。

8. 加酶-抗酶抗体复合物（兔 PAP+鼠 PAP-AP 混合液 1:100）湿盒 37℃，30 min。

9. PBS 洗 5 min×3。

10. 过氧化物酶显色反应：以 DAB/H2O2 液显色 7～10 min（镜下控制显色程度），PBS 洗 5 min×3。

11. 碱性磷酸酶显色反应：以萘酚 AS-MX/坚固蓝（fast blue）显色 10～15 min（镜下控制显色程度），PBS 洗，自来水洗。

12. 缓冲甘油封片，光镜下观察。