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脂肪代谢产物分析
脂肪代谢是机体能量供应的重要来源,脂质的合成与分解失衡则引发脂质代谢紊乱。脂肪酸合成增多,氧化分解降低,会导致细胞内脂质积累。脂肪细胞的积累是肥胖病的基础,也是糖尿病、动脉粥样硬化、肿瘤和心血管疾病等多种疾病发生的重要危险因素。目前用于脂肪代谢产物分析的方法主要有 2 种:脂肪酸合成酶活性测定和脂质含量检测。
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肝火上炎证动物模型
肝火上炎证动物模型,是指动物出现目赤肿痛,头胀头痛,暴聋暴鸣,烦躁易怒,口干口苦,大便结与尿黄短,舌质红,苍燥,脉弦数等证候表现。目前,肝火上炎证动物模型的建立方法为急性虹膜睫状体炎模型替代法。
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磷酸戊糖途径
磷酸戊糖途径(pentose phosphate pathway)是葡萄糖氧化分解的一种方式,可以产生 NADPH,并合成磷酸核糖,为核酸代谢提原料。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)是磷酸戊糖途径的关键酶,催化葡萄糖-6-磷酸氧化为葡萄糖-6-磷酸内酯,同时将 NADP*还原为 NADPH,用于生物合成,并维持细胞内的还原状态。因此,G6PDH 的活性高低在一定程度上反映出生物体的生物合成和抗
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肝阴虚证动物模型
肝阴虚证动物模型,是指动物阴液亏虚、肝失濡养、以头晕眼花、两目干涩、视力减退、颧红、或胁肋灼痛、五心烦热、舌红少苔、脉细数等为常见症的证候的模型。目前,肝阴虚证动物模型的建立方法有两种:四氯化碳加甲状腺素法、四氯化碳加温热中药法。
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肝血瘀阻证动物模型
肝血瘀阻证动物模型,是指动物肝气郁结,血行不畅,血脉阻滞所致表现的证候模型。目前,肝血瘀阻证动物模型的建立方法为鸭乙型肝炎病毒 (DHBV) 法。
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有氧氧化过程关键酶和重要产物测定
在有氧条件下,葡萄糖氧化分解生成二氧化碳和水的过程称为有氧氧化(aerobic oxidation),是生物机体获取能量的主要方式。该过程分为 3 个阶段:第一阶段为糖酵解途径,葡萄糖转变成 2 分子丙酮酸,在细胞质中进行;第二阶段丙酮酸进入线粒体,经丙酮酸脱氢酶复合体催化,脱羧基转化成乙酰 CoA;第三阶段为柠檬酸循环和氧化磷酸化过程。柠檬酸循环的起始物乙酰 CoA,不仅是葡萄糖的氧化分解产物,
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树突状细胞表型和功能检测
树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前公认的体内功能最强大的专职抗原提呈细胞(professional antigen presenting cell,APC), 在免疫应答的首要环节--抗原提呈过程中扮演着重要的角色,是唯一能够活化初始 Th 细胞的 APC,成为适应性免疫应答的始动者;同时,DC 也在诱导机体的免疫耐受中发挥重要作用。在免疫稳定状态下,分布于外周非淋巴组织的 D
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人血性单核巨噬细胞的诱导及分离
巨噬细胞(macrophages,MΦ)是由血液中单核细胞迁入组织后分化形成的成熟类细胞,广泛分布于脾脏、肝脏、腹腔、神经系统以及结缔组织等,具有吞噬杀伤、抗原提呈及免疫调节作用。近年的研究发现巨噬细胞在不同微环境中可以发生不同性质的活化,成为具有不同表面分子和功能特征的亚群。根据其不同的表型特点和功能特点及对 Th1/Th2 应答的诱导,通常将其分为两种类型:经典活化的巨噬细胞(classica
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人外周血树突状细胞的分离
树突状细胞(dendritic cell,DC)是一种贴壁细胞,它在脾脏贴壁细胞中所占的比例小于 1%,细胞轮廓不规则,具有树枝状的突起。DC 不但存在于脾脏等外周淋巴器官中,也存在于外周血中。为了在体外研究 DC 的功能,需要对体内的 DC 细胞(主要是外周血、脾脏、淋巴结)进行分离、纯化。分离纯化 DC 的方法主要有两种:基于细胞物理性状的分离方法(如贴壁法)和基于细胞表面标记的分离方法(如
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人蜕膜免疫细胞的分离及纯化
蜕膜免疫细胞群是母胎免疫耐受的生物学基础,其构成极为特殊,主要由特殊类型的 NK 细胞(CD56 hrighCD16-)(~70%)、T 细胞(~10%)和单核巨噬细胞(~15%)等组成,它们通过表达特殊活化标志和产生大量的细胞因子,在母胎界面局部发挥着不同于外周的免疫调节作用,形成 Th2 亚群免疫优势,并通过旁分泌作用调控滋养细胞的生长、分化和迁移,从而对妊娠的维持起重要的局部调节作用。
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肝郁证动物模型
肝郁证是中医情志致病的代表证候,主要指肝失疏泄,气机郁滞,以情志抑郁,喜叹息,胸胁或少腹胀闷串通,妇女乳房胀痛,月经不调,脉弦等为常见症的证候。目前,肝郁证动物模型的主要造模方法有六种:夹尾激怒法、枷锁模具激怒法、限动水浸郁怒法、慢性应激程序法、艾叶注射法、电刺激加噪声干扰法。
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心血瘀阻证动物模型
心血瘀阻证动物模型,是以胸闷心悸,心痛如制,痛引肩背内臂、唇舌紫暗、脉细涩或结代等为需见症的证候。目前,心血瘀阻证动物模型常见的造模方法有犬冠状动脉结扎法。
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心阳虚证动物模型
心阳虚证动物模型,是在心气虚证的基础上,出现虚寒证候即为心阳虚证,目前单纯心阳虚证动物模型主要的造模方法有普罗帕酮法、高脂饮食加脑垂体后叶素法等。
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细胞毒性T细胞表位的鉴定
细胞毒性 T 细胞表位的鉴定方法主要包括两种,一种是先获得抗原特异性 CTL 细胞克隆,再分别将蛋白质抗原的系列多肽片段与相应细胞(如 TAP 缺陷的人源性 T2 细胞、鼠源性 RMA-S 细胞等)一起孵育后用作靶细胞,通过检测 CTL 细胞克隆对靶细胞的细胞毒活性,鉴定出 CTL 表位。抗原特异性 CTL 细胞克隆可以从肿瘤浸润淋巴细胞、淋巴结细胞或荷瘤机体外周血单个核细胞(PBMC)、病毒感染
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MHC分型实验
MHC 分型是指通过对外周血、细胞或机体中 MHC 进行分析,以辅助进行 T 细胞表位鉴定。
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过敏反应检查法检定药品生物制品成品实验
过敏反应检查法检定药品生物制品成品实验是使用供试品溶液注射实验动物,后续用以观察动物供试品处理后的生命状态,并与注射标准品溶液的动物进行比对。目前用于过敏反应检查法检定药品生物制品成品实验主要有 1 种:过敏反应检查法。
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无氧氧化途径中关键酶和重要产物测定
葡萄糖经历糖酵解(glycolysis)的 10 步代谢反应,生成酮酸,然后进一步生成乳酸,或者进入线粒体脱羧成为乙酰辅酶 A(CoA),进入柠檬酸循环。在葡萄糖无氧氧化生成乳酸的代谢途径中,有 4 个关键酶决定着反应速度和方向,即己糖激酶(hexokinase,HK)、磷酸果糖激酶-1(phosphofructokinase-1,PFK-1)、 丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)
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蛋白芯片技术
蛋白芯片技术,也称蛋白质微阵列(protein microarray),是一种高通量的蛋白分析技术,不仅可以在蛋白质水平上检测基因的表达,用于蛋白质表达谱研究;还可以大规模研究抗原-抗体及其他各种蛋白质-蛋白质的相互作用,以及DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用。目前,用于蛋白芯片技术的方法主要有1种:主要包括芯片制作、样品准备、生物化学反应、检测分析的步骤。
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Th细胞表位的鉴定
Th 细胞表位的鉴定方法主要包括两种,一种是先从患病机体(如肿瘤、病毒感染等)或抗原免疫后机体获得肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)淋巴结细胞或 PBMC。体外用抗原刺激后,进行有限稀释,或分离出 CD4+T 细胞,进行有限稀释。然后再用 γ 射线照射后或丝裂霉素 C 处理后的与相应抗原或其片段孵育过的 PBMC、EB 病毒(EBV)转化后 B 细胞、DC 等作为 APC,用于刺激细胞,获得 CD4T 细
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组织和细胞内miRNA丰度的检测实验
miRNA是长度为20-23个核苷酸的单链小分子RNA,在真核生物由RNA聚合酶II催化、以基因组DNA为模板转录产生,但不翻译为蛋白质。miRNA在进化上保守,并广泛存在于动物、植物、真菌及病毒基因组中。目前,用于组织和细胞内miRNA丰度的检测实验的方法主要有5种:Northern印迹测定组织和细胞内miRNA丰度、实时定量PCR测定组织和细胞内miRNA丰度、微阵列芯片测定组织和细胞内miR
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