细胞实验

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

以三种不同的细胞浓度在多孔板中培养三组细胞，在达到平台期之前，每天计数一个板中的细胞。

将培养物移至另一培养箱，关闭空培养箱电源，然后用去污剂和乙醇擦洗，开启加热开关，以便使培养箱干燥。盘中换新鲜水，重新通入 CO2。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

在传代培养之后，细胞会呈现出延迟期、指数或对数期和静止期（平台期）所特有的生长形式。对数期和平台期能提供细胞系的重要信息，而指数生长期可给出它们的 PDT ，平台期给出最大的细胞密度（即饱和密度）。PDT 的测定可用于细胞对不同的抑因子或刺激性培养条件，如不同营养浓度、激素作用或有毒药物反应性的定量研究。对于连续传代也是一种良好的监视指标。它能计数细胞产量，以及传代时所需的稀释度

固定细胞，顺序加入一抗和二抗，通过 UV 光观察。

配制储存浓缩液并冷冻保存。需要的时候解冻、混合、无菌过滤、保存。

收集细胞，用 D-PBSA 洗涤，重新制成 5×107个/ml 的细胞悬液，制备细胞抽提物并置于 -70°C 保存。准备凝胶装置，取 1~2 μl的细胞抽提物、标准品及对照点样于琼脂糖凝胶。槽内充满液体，将琼脂糖凝胶置于其中，电泳 25 min，加入酶反应试剂，孵育 5~20 min 后，冲洗凝胶，干燥，检査已完成的凝胶酶区带的显示。

用适量的超纯水将包装中的干粉全部溶解：将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加干粉。当所有的成分完全溶解后，培养基应立即过滤不能放置，否则会产生沉淀或有微生物污染。当最后的成分（如，谷氨酰胺、NaHCO3或血清）加完后，最好调整pH 。

比色法可测定在任何一个时间点上的总蛋白量。在一定时期内连续观察可以用来测 定净蛋白质的累积或丟失（也就是合成的蛋白质—降解的蛋白质）。此时蛋白质合成 可以用放射标的氨基酸与细胞孵育来进行液闪测定，诸如 3H -亮氨酸或 35S-甲硫氨酸，所测定的是掺入到 106 个细胞或是某一段时间内每克蛋白质中的放射活性。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。

溶解蛋白质，与染料混匀，10 min后阅读O.D.。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

固定阻滞于分裂中期的细胞，在低渗液中膨胀，将细胞滴在载玻片上，染色，观察 [ Rothfels and Siminovitch，1958；Rooney and Czepulkowski，1986 ] 。

不断地搅拌将干粉溶解，调整至终体积，检测 pH 和传导率，按预订量分装进行高压灭菌。

在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

打开显微镜，校准光路。在标本有关区域聚焦。检査相机与电脑的连接，将光导向相机，聚焦，保存图像。