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3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的标记指数实验
细胞培养至适当密度,用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min,清洗后固定细胞,除去未掺入的前体物,准备同位素放射自显术。来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版
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口腔角质形成细胞
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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血清的透析
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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消除微生物污染
通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞,以高浓度抗生素清洗培养物数次,然后将培养物传代,用加抗生素的培养基传三次,再用不加抗生素的培养基传三次,每次传代后都要检测是否污染。
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血清的收集与灭菌
收集血液,使其凝固,分离血清。通过孔径逐级减少的过滤器过滤血清。分瓶,包装,冷冻保存。
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用大型串联式过滤器灭菌过滤
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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淋巴细胞的分离
通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后,将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficoll-Hypaque 层上面。离心后,大部分淋巴细胞位于 Ficoll-Hypaque 和血浆之间的界面。
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贴壁效率的测定实验
以低密度接种细胞,温育直至集落形成,染色与计数集落来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版
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PCR 测定支原体
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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用小型串联式过滤器灭菌过滤
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验
以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养,每天计数细胞直至平台期。来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版
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荧光检测支原体
在无抗生素情况下,至少将细胞培养一周,将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中,孵育 3~5d ,将细胞固定和染色,寻找细胞核之外的荧光。
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真空过滤瓶灭菌过滤实验
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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多孔培养板中单层培养细胞生长曲线的绘制实验
以三种不同的细胞浓度在多孔板中培养三组细胞,在达到平台期之前,每天计数一个板中的细胞。
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清洁培养箱
将培养物移至另一培养箱,关闭空培养箱电源,然后用去污剂和乙醇擦洗,开启加热开关,以便使培养箱干燥。盘中换新鲜水,重新通入 CO2。
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用注射器式过滤运菌过滤
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
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培养瓶中单层培养细胞生长曲线的绘制实验
在传代培养之后,细胞会呈现出延迟期、指数或对数期和静止期(平台期)所特有的生长形式。对数期和平台期能提供细胞系的重要信息,而指数生长期可给出它们的 PDT ,平台期给出最大的细胞密度(即饱和密度)。PDT 的测定可用于细胞对不同的抑因子或刺激性培养条件,如不同营养浓度、激素作用或有毒药物反应性的定量研究。对于连续传代也是一种良好的监视指标。它能计数细胞产量,以及传代时所需的稀释度
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间接免疫荧光
固定细胞,顺序加入一抗和二抗,通过 UV 光观察。
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特制培养基的配制
配制储存浓缩液并冷冻保存。需要的时候解冻、混合、无菌过滤、保存。
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同工酶分析
收集细胞,用 D-PBSA 洗涤,重新制成 5×107个/ml 的细胞悬液,制备细胞抽提物并置于 -70°C 保存。准备凝胶装置,取 1~2 μl的细胞抽提物、标准品及对照点样于琼脂糖凝胶。槽内充满液体,将琼脂糖凝胶置于其中,电泳 25 min,加入酶反应试剂,孵育 5~20 min 后,冲洗凝胶,干燥,检査已完成的凝胶酶区带的显示。
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