同工酶分析

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

收集细胞，用 D-PBSA 洗涤，重新制成 5×10⁷个/ml 的细胞悬液，制备细胞抽提物并置于 -70°C 保存。准备凝胶装置，取 1~2 μl的细胞抽提物、标准品及对照点样于琼脂糖凝胶。槽内充满液体，将琼脂糖凝胶置于其中，电泳 25 min，加入酶反应试剂，孵育 5~20 min 后，冲洗凝胶，干燥，检査已完成的凝胶酶区带的显示。

来源：丁香实验

操作方法

方案16.10 同工酶分析

一、抽提物的制备 1. 按常规方法培养细胞达 2×107 个活细胞。 2. 依照具体细胞系实验推荐的方法收集细胞。 3. 细胞团重悬于 D-PBSA 中，计数活细胞。 4. 细胞悬液以 300 g 离心 5~10 min 沉淀细胞，倾去上清液。 5. 重复步骤 3 和 4 , 总共洗涤细胞 3 次。 6. 向细胞团块中加人 100 μl 抽提液（细胞抽提缓冲液（Innovative C