自然杀伤细胞活性测定

3.¹²⁵I-UdR 释放实验：¹²⁵I-2＇脱氧尿嘧啶核苷（¹²⁵I-UdR）是胸腺嘧啶核苷的类似物，作为 DNA 合成的前体物，它能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核 DNA 链上，¹²⁵I 的物理半寿期为 59.7 天。因此，可用 ¹²⁵I-UdR 标记体外传代培养的靶细胞，以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞，进行体外 NK 细胞活性检测。被效应细胞杀伤的靶细胞可释放 125 I-UdR，用 γ- 计数仪测定其放射性强度，以 ¹²⁵I-UdR 释放百分率表示 NK 细胞的活性。

5. 效应细胞 CD107a 标记的流式细胞术检测法：NK 细胞质内含有大量的具有细胞溶解作用的颗粒，在活化作用后，NK 细胞会通过细胞免疫突触将这些颗粒释放到靶细胞中。这些细胞颗粒包括细胞溶解蛋白穿孔素和颗粒酶，其中颗粒酶又包括了在膜上表达的溶酶体相关膜蛋白 1（lysosome-associated membrane protein 1， LAMP1），又称 CD107a，是 NK 细胞脱颗粒的标志物。NK 细胞杀伤靶细胞时，随着脱颗粒的发生，CD107a 分子被转运到细胞膜表面，且 CD107a 分子的表达上调与穿孔素的分泌一致，其表达水平与 NK 细胞的杀伤活性显著相关。因此 CD107a 分子阳性表达的 NK 细胞可代表具有杀伤活性的 NK 细胞。

6. 靶细胞 CSFE 标记的流式细胞术检测法：羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE），是一种可对活细胞进行标记的荧光染料，可自由穿透细胞膜，进入细胞内被酯酶转化成带负电荷的 CFSE，并释放荧光。碘化丙啶（PI）可与凋亡细胞质内的 DNA 结合。如效应细胞与靶细胞混合前将靶细胞先用 CFSE 染色，与效靶细胞作用后再用 PI 染色，即可严格区分靶细胞的凋亡和效应细胞的死亡情况，即 CFSE＋PI+双阳性细胞为特异性死亡的靶细胞，通过流式细胞术即可准确测定靶细胞的死亡情况，从而测定效应细胞的杀伤活性。