细胞膜完整性及膜转运功能检测实验
最新修订时间：
简介
区分活细胞和死亡细胞的关键在于死亡细胞膜转运功能及膜完整性的丧失。许多阳离子染料，如台盼蓝、碘化丙锭（PI）、溴化乙锭（EB）以及7-氨基放线菌素D（7-ADD）等，常被用于检测细胞的存活率。活细胞由于膜具有完整性而不被着色，死亡细胞（如坏死细胞或晚期凋亡细胞）由于其膜完整性的丧失而被着色。
内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》
来源：丁香实验
操作方法
1. 主要试剂的的配制碘化丙锭（PI）染色液（4℃ 避光保存）：Pl，100 μg/ml；TritonX-100，1.0%；NaCl 0.9%。2. 操作流程2.1 样本的准备2.1.1 培养细胞收集悬浮细胞于 Eppendorf 管中。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液，1000r/min离心 5 min。2.1.2 新鲜实体组织取材组织用 PBS 漂洗干净后，浸泡在含 PBS 的平皿或青霉
Hoechst-PI 染色法1. 主要试剂的配制碘化丙锭贮存液：100 μg/ml，4℃ 避光保存。Hoechst 33258 贮存液：100 μg/ml，4℃ 避光保存。2. 操作流程2.1 常规制备单细胞悬液（方法同 PI 染色法），加入 Hoechst 33258 溶液，使其终浓度为 1 μg/ml，37℃ 孵育 7 min，离心后弃染液，用PBS重悬。2.2 加入 PI 染液，使其终浓度为 5 μg/ml，置冰块上片
乙酰乙酸（FDA）染色法1. 主要试剂的配制FDA（Molecularprobes，In.OR，USA）保存液 1 mg/ml 的丙酮溶液。PI（Sigma，MO，USA）保存液 1 mg/ml 的水溶液。2. 操作流程2.1 常规收集细胞（1×106），悬浮于 1 ml 的Hank缓冲液（HBSS）中，加入 2 μl FDA 保存液，于 37℃ 孵育 15 min，加入 20 μl PI 保存液，室温下染色 5 min
膜联蛋白 V 染色法1. 主要试剂的配制染色缓冲液：10 mmol/L HEPES-NaOH，pH7.4；140 mmol/L NaCl；2.5 mmol/LCaCl2。FITC-膜联蛋白 V 染色液：结合有FITC-膜联蛋白 V 按 1.0 mg/ml 溶于染色缓冲液中（新鲜配制）。PI（Sigma，MO，USA）保存液： 1 mg/ml的水溶液，于 4℃ 避光保存。2. 操作流程2.1 （0.1～1）×106 细
相关产品推荐
相关问答
