细胞因子生物学活性检测实验

一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性 1. 取6～8 周龄C57BL16小鼠，拉颈处死，无菌取胸腺置不锈钢网筛上，用注射器针蕊研磨成细胞悬液调整细胞数为1.5×107 /ml 　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 细胞悬液内加入ConA，使终浓度为3 μg/ml，在96孔培养板中加100 μl（1.5×106细胞） 　　　　　　　　　　　　　

一、3H-TdR掺入法 　　　　　　　　 1. IL-2依赖的CTLL用10 ％FCS RPMI1640洗涤2 次，每次1000 rpm，5 min，除去原培养液中的IL-2 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 调整活细胞数1×105 /ml 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 3. 96 孔平底培养板中每孔加100 μl，CTLL悬液（1×104 /孔） 　　

1. IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI1640洗涤2 次每次1000 rpm，5 min，除去原培养液中的IL-6 　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 用10 ％FCS-RPMI1640调整活细胞数2×104 /ml 　　　　　　　　　　　　　　　　 3. 96 孔平底培养板中每孔加100 μl 7TD1悬液（2×103 /孔） 　　　　　　　　　　　　　

1. 96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN，每个稀释度设3 孔，每孔50 μl，病毒对照不加IFN 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 每孔加入100 μl 1.5～2×105 /ml Wish或Hep-2细胞悬液，37℃、CO2孵箱培养6～12 h，使细胞贴壁为单层 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 3. 每孔加入50 μl含100个TCID50 VSV

1. 0.25 ％胰蛋白酶消化处于对数生长期的L929细胞 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 用RPMI1640洗涤细胞后，调整细胞浓度至2×106 /ml 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 3. 加入3H-TdR，20 μci/ml 　　　　　　　　　　　　　 4. 置37 ℃，5 ％CO2培养箱中2～3 h，摇动1 次/30 min