原理
IL-2主要由活化T细胞产生，又为T细胞增殖所必需，故称T细胞生长因子（ TCell Growth factor, TCGF ）。IL-2产生的水平反映T细胞的功能，仅是免疫调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关，CTLL是C57BL/6来源的。鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系，由Gills 1977年建立，只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。
材料与仪器
CTLL
FCS RPMI1640 3H-TdR PPO POPOP 二甲苯 MTT DMSO
培养板 收集仪 CO2孵箱 计数仪
FCS RPMI1640 3H-TdR PPO POPOP 二甲苯 MTT DMSO
培养板 收集仪 CO2孵箱 计数仪
步骤
一、3H-TdR掺入法
1. IL-2依赖的CTLL用10 ％FCS RPMI1640洗涤2 次，每次1000 rpm，5 min，除去原培养液中的IL-2
7. 用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上
将标准IL-2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图，纵轴采用概率座标（probit），横座标为Log2稀释倍数。从50 ％的最高cpm值画一横线，k标准和待检斜线的交点，即可计算出待检样品IL-2的活性单位。
如标准品50 ％最大cpm值时为1 u/ml，则待测标本1∶4时为1 u/ml，原液则为4 μ/ml
二、MTT法
1. IL-2依赖的CTLL用10 ％FCS RPMI1640洗涤2 次，每次1000 rpm，5 min, 除去原培养液中的IL-2
1. IL-2依赖的CTLL用10 ％FCS RPMI1640洗涤2 次，每次1000 rpm，5 min，除去原培养液中的IL-2
2. 调整活细胞数1×105 /ml
3. 96 孔平底培养板中每孔加100 μl，CTLL悬液（1×104 /孔）
4. 加入不同稀释度标准IL-2和待测样品
5. 37 ℃CO2孵箱，培养18～24 h
6. 每孔加3H-TdR 0.5 μci/50 μl，4-6 h
7. 用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上
8. 干燥后，移入液闪瓶中，加入1 ml闪烁液，于液闪仪中测β射线的cpm值
9. 计算（举例）
将标准IL-2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图，纵轴采用概率座标（probit），横座标为Log2稀释倍数。从50 ％的最高cpm值画一横线，k标准和待检斜线的交点，即可计算出待检样品IL-2的活性单位。
如标准品50 ％最大cpm值时为1 u/ml，则待测标本1∶4时为1 u/ml，原液则为4 μ/ml
二、MTT法
MTT（3-（4，5-dimcthylthioazol-2-yl）-2，5-diphenyl-tetrazolium bromide，四甲基偶氮唑盐）可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲 （Formazan），将结晶的溶解释放，可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性，从而推知待检样品中IL-2的水平。在掌握良好的实验条件下，MTT法的敏感性可接近3H-TdR同位素掺入法。
1. IL-2依赖的CTLL用10 ％FCS RPMI1640洗涤2 次，每次1000 rpm，5 min, 除去原培养液中的IL-2
2. 调整活细胞数1～2×105 /ml
3. 96 孔平底培养板中每孔加100 μl，CTLL悬液（1～2×104 /孔）
4. 加入不同稀释度标准IL-2和待检样品，100 μl/孔，每份设3个重复孔
5. CO2孵箱培养18～24 h
7. 轻轻吸出150 μl上清，加入150 μl二甲亚砜（DMSO）或酸性异丙醇（异丙醇溶于0.04 N HCl）
6. 每孔加10 μl MTT（5 mg/ml溶于PBS），4 h，37 ℃
7. 轻轻吸出150 μl上清，加入150 μl二甲亚砜（DMSO）或酸性异丙醇（异丙醇溶于0.04 N HCl）
8. 溶解10 min，测OD值（570 nM）
注意事项
1. CTLL细胞洗涤要充分，但操作必须轻柔，离心速度不宜过高，否则影响细胞的增殖。
2. 避免同位素污染。
3. 加标准IL-2或待测样品时，按从低浓度到高浓度顺序加。
4. 加入3H-TdR最适时机是阴性对照细胞开始全部死亡。
5. CTLL细胞冻存后复苏较困难，用含有丝分裂原条件培养基长期培养容易发生变异。
2. 避免同位素污染。
3. 加标准IL-2或待测样品时，按从低浓度到高浓度顺序加。
4. 加入3H-TdR最适时机是阴性对照细胞开始全部死亡。
5. CTLL细胞冻存后复苏较困难，用含有丝分裂原条件培养基长期培养容易发生变异。
来源：丁香实验
