原理
干扰素能刺激某些指示细胞（如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺单层细胞）产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒（VSV）的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。
材料与仪器
VSV WISH HeP-2细胞株
MTT 二甲亚砜 刚果红 结晶紫 FCS RPMI1640
培养板 培养瓶 CO2孵箱 超净台 检测仪
MTT 二甲亚砜 刚果红 结晶紫 FCS RPMI1640
培养板 培养瓶 CO2孵箱 超净台 检测仪
步骤
1. 96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN，每个稀释度设3 孔，每孔50 μl，病毒对照不加IFN
8. 计算
以保护半数（50％）细胞免受病毒损害的最高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。
2. 每孔加入100 μl 1.5～2×105 /ml Wish或Hep-2细胞悬液，37℃、CO2孵箱培养6～12 h，使细胞贴壁为单层
3. 每孔加入50 μl含100个TCID50 VSV，细胞对照不加病毒液
4. 根据细胞病变状态，终止培养前3～4 h，加入5 mg/ml MTT，15 μL/孔
5. 加入适量生理盐水，用滴管轻轻吹吸弃去悬浮病变细胞和死细胞
6. 200 μl/孔 二甲亚砜（DMSO），作用10 min
7. 测OD（570nm），表示活细胞中含甲 的量，也可用刚果红摄入法、结晶紫染色法测定IFN对活细胞的保护水平
8. 计算
以保护半数（50％）细胞免受病毒损害的最高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。
注意事项
1. 实验时先加IFN，后加指示细胞，以使细胞均匀分布于培养板底部。
2. 本法对天然培养上清或重组IFN-α、IFN-β和IFN-γ均可检测其活性单位。
2. 本法对天然培养上清或重组IFN-α、IFN-β和IFN-γ均可检测其活性单位。
来源：丁香实验
