原理
IL-6在体外能促进B细胞杂交瘤的生长，故又称为杂交瘤生长因子（HGF）。小鼠B细胞杂交瘤7TD1是一株对IL-6依赖的细胞系，由Van Snick 1986年建立，只有在IL-6存在的培养基中才能生长，可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6水平。这类IL-6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系还有MH60BSF2、B9等。
材料与仪器
7TD1细胞系
RPMI1640 3H-TdR PPO POPOP 二甲苯
滤纸 培养板 收集仪 CO2孵箱 计数仪
RPMI1640 3H-TdR PPO POPOP 二甲苯
滤纸 培养板 收集仪 CO2孵箱 计数仪
步骤
1. IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI1640洗涤2 次每次1000 rpm，5 min，除去原培养液中的IL-6
7. 用多头细胞收集仪收获于玻璃纤维滤纸上
2. 用10 ％FCS-RPMI1640调整活细胞数2×104 /ml
3. 96 孔平底培养板中每孔加100 μl 7TD1悬液（2×103 /孔）
4. 加入不同稀释度标准IL-6和待检样品（100 μl/孔）
5. 37 ℃，5 ％CO2孵箱培养48～72 h
6. 每孔加3H-TdR 0.5 μCi/50 μl，10 h
7. 用多头细胞收集仪收获于玻璃纤维滤纸上
8. 干燥后移入液闪瓶中，加入1 ml闪烁液，于液闪仪中测β射线的cpm值。
9. 计算
（1）根据cpm值，将能使7TD1细胞3H-TdR掺入cpm值达到最大值50 ％的IL-6的活性定为1 u/ml。
（2）以刺激指数（SI）表示。
9. 计算
（1）根据cpm值，将能使7TD1细胞3H-TdR掺入cpm值达到最大值50 ％的IL-6的活性定为1 u/ml。
（2）以刺激指数（SI）表示。
注意事项
1. 7TD1细胞洗涤要充分、轻柔，每次弃洗涤上清力求彻底。
2. 避免同位素污染。
3. 加样品时，应从低浓度到高浓度顺序加。
4. 加入3H-TdR最适时机是阴性对照95 ％以上死亡。
5. 为了增加检测方法的敏感性，可采用新复苏7TD1细胞，或用pH4.0枸椽酸缓冲液处理培养状态的7TD1细胞。
2. 避免同位素污染。
3. 加样品时，应从低浓度到高浓度顺序加。
4. 加入3H-TdR最适时机是阴性对照95 ％以上死亡。
5. 为了增加检测方法的敏感性，可采用新复苏7TD1细胞，或用pH4.0枸椽酸缓冲液处理培养状态的7TD1细胞。
来源：丁香实验
