外泌体知识宝典

一、样品预处理1、取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；2、样品初始用量：（单次提取时的样品量）样品名称最低量细胞培养上清液20 mL3、离心去细胞颗粒：将样品转移至离心管中，于4℃以3000 g离心10 min，去除样品中的细胞颗粒；（注：若沉淀较多，可3000 g，10 min重复离心1次，取离心上清液。）4、

差速超速离心法主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离大小不同的细胞器。起始离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。选取所需沉淀或者上清液样本改用较高的离心速度和超速离心样本，将较小样本颗粒沉降，以此类推，达到分离不同密度、大小颗粒样本的目的。

差速超速离心法主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离大小不同的细胞器。起始离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。选取所需沉淀或者上清液样本改用较高的离心速度和超速离心样本，将较小样本颗粒沉降，以此类推，达到分离不同密度、大小颗粒样本的目的。

蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot，通过特异性抗体与凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，分析其着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况。Western Blot 鉴定外泌体蛋白可以检测膜蛋白（如 CD63、CD81、CD82、HLA、integrin 等），检测膜结合蛋白或外泌体游离蛋白（前者如 ALIX、TSG101，后者如 HSP70、A

外泌体是直径约为 30~200 nm，密度在 1.13~1.21 g/mL 的小囊泡。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等，外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体 （也称为多囊泡体 ）的膜性囊泡。而 NTA（Nanoparticle Tracking Analysis）技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。

外泌体是直径约为 30~200 nm，密度在 1.13~1.21 g/mL 的小囊泡。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等，外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体 （也称为多囊泡体） 的膜性囊泡。透射电子显微镜 （Transmission Electron Microscope, TEM） 是利用高能电子束充当照明光源而进行放大成像的大型显微分析设备，可以观察 nm 级细微结构，分辨

沉淀技术在半个世纪前就应用于富集和提纯病毒颗粒，而 EVs 和病毒颗粒有相近的生物理化特性，因此此方法根据溶解度将 EVs 与其它化合物分离。最常用的亲水多聚物沉淀法是 PEG 沉淀法，PEG 亲水性强，有较广范围的分子量，优良的适应性和富集功能使其成为目前商品化EVs富集试剂开发的热点。

CD63 外囊泡阳性分选试剂盒，设计通过免疫磁珠正选方式从血浆/血清、培养上清物中分离高纯度的人外囊泡。外囊泡被识别 CD63 四聚体抗体复合物和磁珠标记。被标记的外囊泡被吸附在管壁上，未经标记的组分被倒入新的离心管。分离到的外囊泡可用于下游应用，如DNA/RNA提取，WB或质谱分析。