蛋白质组学

3.1 蛋白质提取 ( 1 ) 新鲜植物组织在液氮中冷冻，然后在自动低温粉碎机中预先冷却的钢杯中将材料研磨成细碎的粉末（见注释 4) 。 ( 2 ) 在一个 15 ml 的离心管（falcon tube) 中加入 3 ml 提取缓冲液，并加入 1 g 研碎的植物组织，涡旋后在冰浴中振荡 10 min ( 见注释5) 。 ( 3 ) 加入等体积的 Tris 饱和苯酚，室温下振荡 10 min

众所周知，在实验室内和实验室间难以保证双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的重复性。在我们实验室，强制性地要求严格遵守标准操作程序（sop ) , 以确保不同的操作者可以获得可重复的分离结果。小麦白面粉样品的 2D 胶图谱示例如图 16.1 所示。采用 Tris-CaCl2 提取法提取的并非“总蛋白”，而是小麦面粉中除谷蛋白之外的有代表性的蛋白样品。如果提取总蛋白，由于谷蛋白的含量很高，可能会掩盖掉其他较低丰度

3.1 PROTICdb 概述 在输入或浏览数据时，每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户（由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户，首先要创建一个新的项目。一旦建立，该项目就属于这个用户，这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度，尽量不要用手动输入操作。因此，网页上包含受控词汇或以前加载到数据库的其他数据的组合框。当建立一个新的 PROTICdb 数据库时，受控词汇库是空

用 Progenesis、Excel 和 The Unscrambler 对 2D 凝胶进行多元分析。 3.1 确定研究方案后建立蛋白的 2D 凝胶 在本章节中不再阐述，但要确定染色方法以便进行凝胶的定量分析（见注释 1 )。 3.2 用具备透射模式扫描的扫描仪使凝胶数字化在本节中不再阐述，但要确保用高色素、高分辨率扫描图片（见注释 2 ) 并且在图像处理软件中用正确的格式保存图片（见注释

3.1 第一向：在 IPG 胶条中进行等电聚焦（ IPG-IEF) 采用 IPG ( IPG-Dalt ) 的双向电泳技术的第一向，等电聚焦（IEF) 是采用独立的，3 mm 宽的，附着在 GelBond PAG 支持膜上的 IPG 胶条进行的。目前已有 7cm、11cm、18cm 和（或）24 cm 长的几乎所有需要的 pH 范围的预制 Immobiline 干胶条。例如，宽 pH 范围的 I

建议在短日照条件下培养材料以诱导营养生长，并在照光的早期收取材料以提高获得完整叶绿体的产率。所以试剂应在收集材料之前准备好，并连同其他一些设备，如离心机转头及离心管等在冰箱或冰上冷却至 0~4°C。为避免叶绿体过多地暴露于光下或破碎，所有操作应尽可能在绿光下迅速完成。整个分离过程 30~40 min 可以完成。 ( 1 ) 在 10 h 光照（23°C ) / 14 h 黑暗（17°C ) 光周

双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。

一、材料 1 细胞培养和裂解 （1）小鼠脑垂体 AtT20 和 AtT20 (proSAAS) 细胞系。 AtT20 .(proSAAS) 细胞系通过用包含一个新霉素抗性基因的 proSAAS 表达载体转染 AtT2 0 细胞，再利用该基因对细胞毒性药物 G4 1 8 的抗性挑选阳性细胞得到（11)。 （2）含有 1 0 % 胎 牛 血 清（Wisent Inc.