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层析法
一、粗制裂解物的制备在制备初始裂解物时使细菌培养容量和细胞浓度与预计的DNA含量和所用柱子对质粒DNA的结合力相适合是非常重要的。过载的柱子会使系统的性能降低。而且裂解物黏度过高,需要进行强有力的混合,会导致细菌基因组DNA的剪切和随后的质粒DNA的污染。通过层析方法制备的质粒DNA最常见的污染物是高分子质量的RNA。这种污染物通过往重悬的细胞沉淀里加人5 0 μg/ml的RNA酶A可降低。试剂同Qiagen-tip柱及包括RNA酶的5 Prime—3 Prime柱一起提供。当粗裂解物上样到柱
操作方法所属实验:质粒 DNA 的大量制备实验
构建硫氧还蛋白肽适配体组合库
4dNTP 混合物:各 5 mmol/L 的 dTTP、dATP、dGTP 和 dCTP10 U/ul Ava II 和 2 U/ul Rsr II 限制性内切核酸酶和 10×反应缓冲液(New England Biolabs)10 mmol/L Tris·Cl, pH 8非变性上样缓冲液超纯水(可选冲洗用的灭菌水;Fisher Scientific)SOC 培养基,预热到 37℃LB 平板和液体培养基, 含 50 Mg/ml 氨苄青霉素3. 耗材QIAquick 胶回收试剂盒(Qiagen)大规模质粒
操作方法所属实验:构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验
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Miniprep/Qiagen kit

  Materials For purifying plasmid DNA from Escherichia coli cells, the Qiagen Spin Miniprep Kit produces quite reliable results. Do not autoclave solutions containing isopropanol or MOPS; use sterile filtration if necessary.

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Qiagen MIDI protocol

(stored in 4℃) by vortexing repeatedly, leaving no clumps. Transfer the suspension into a round-bottom 13 ml polycarbonate tube. 4. Add 4 ml of buffer P2 (stored in Qiagen buffers box) and mix by covering with parafilm and inverting 4-6 times. Incubate

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细胞团抽提
一、开始实验前,必须准备以下试剂:(a)蛋白酶溶剂溶解:向 Qiagen® 冷冻干燥的蛋白酶中加适量蛋白酶溶剂。该溶液 2~8°C 保存 2 个月内稳定。(b)AW 1 和 AW 2 缓冲液:向装有 AW 1 和 AW 2 浓缩液的瓶子中加人适量无水乙醇。AW 1 和 AW 2 缓冲液室温下一年内稳定。(c)AL 缓冲液:用前颠倒充分混匀。二、操作步骤(试剂盒生产商的操作步骤,稍加修改)如果细胞不是以培养基悬浮的细胞悬液,从步骤 5 进行。如果收到的是在培养基中的细胞团:1. 样品 20000
操作方法所属实验:细胞系的 DNA STR 谱
备择方案
1. 实验前准备主要材料见基本方案附加材料含有 20 mmol/L 和 500 mool/L 咪唑的 Superflow 层析缓冲液NTA Superflow 树脂(Qiagen)C-10/10 或 C-10/20 FPLC 柱(Amersham Pharmacia Biotech)2. 使用FPLC,按每 500 ml 原细胞培养体积:1 ml NTA Superflow 树脂的比例,在 20% 乙醇中装好 NTA Superflow 柱。将柱装入 FPLC 装置中。3. 用 5 倍柱体
操作方法所属实验:重组的果蝇 NAP-1 的表达和纯化实验
实验问答274 围观
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Qiagen MIDI protocol(QIAGEN plasmid Midi试剂盒)

质粒DNA的提纯是基因工程实验中最常用的试验方法之一,质粒DNA提纯效率和质量与其后续实验步骤(如PCR扩增、酶切、连接、转化大肠杆菌和转染真核细胞等)的成功与否有着直接的关系,因此高效快速地从细菌细胞中提纯质粒DNA 具有重要的意义,本文主要介绍了由QIAGEN plasmid Midi试剂盒方法提取质粒的方法。1. Pick a single colony from a streak plate and inoculate 25 ml of LB with appropriate

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QIAGEN Plasmid plus Kit——超快纯化多至10 mg转染级别纯质粒

      ♦利用真空方式超快速进行质粒纯化,碱裂解步骤后,利用QIAfilter无须离心即可澄清裂解液,然后离心柱安置于真空底座(例如:QIAvac 24 Plus 见图1)上进行DNA的洗涤和洗脱。Midi and Maxi kit 20 分钟内可纯化24 个样本Mega和Giga Kit可分别在40,50分钟内处理12个样本。 ♦QIAGEN Plasmid plus Midi/Maxi Kit 提供优化的高产量protocol 并采取高洗脱体积,确保纯化得到高产量质粒

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微量 DNA 建库测序方案
1. DNA 纯化过程中的洗脱液应使用 QIAGEN 的 Buffer EB、H2O、10 mM Tris 或低浓度 TE(0.1x TE, 0.1 mM EDTA)。含 EDTA 的 1 x TE buffer 会影响 DNA 打断,如果使用了 TE buffer 需要先用磁珠纯化掉该 buffer。2. 每次实验需重新配置 80% 乙醇,磁珠使用前室温平衡 20—30 min。3. 文库扩增非必选步骤。一般起始样本大于 50 ng 可进行 PCR-free 文库构建。4.可以通过打断时间
操作方法所属实验:微量样本核酸
M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用
模板突变效率依赖模板的纯度,因此高纯度 dU-ssDNA 的应用对库的成功构建至关重要。我们用 Qiagen QIAprep  Spin  M13 Kit 来纯化 dU-ssDNA,下面就是 Qiagen 方案的一个修改版。对一个中等拷贝的噬菌粒而言(如 PS1607,其包含 pBR322 的骨架),这个方案至少能获得 20 μg 的 dU-ssDNA,这足以满足建库的需要(见注 2)。( 1 ) 从新鲜的 LB/抗菌素板上挑出一个含有某噬菌粒的 E.coli CJ236 ( 或者其他 dut
操作方法所属实验:M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用实验
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【共享】经验:The RNeasy Mini Kit from Qiagen

The RNeasy Mini Kit from Qiagen is designed for RNA extraction, although the basic format is similar to other Qiagen products designed to purify nucleic acids: ion exchange columns specifically bind RNA which is purified by wash steps

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Large Scale Plasmid Preps: Qiagen/Cesium Method

according to the Qiagen Maxi or Mega prep protocol. Resuspend the DNA in 3.7 mL of T.E. Add 3.7 gm. CsCl and 0.37 mL of 1 mg/mL ethidium bromide. Check the density of the DNA solusion by placing 0.01 mL (= V) on an analytical balance and recording

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PCR 反应中 Taq 酶的选择
效率低一些,有的还容易降解引物,且产物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。目前市面上主要有两类产品,一类是混合型的高保真酶,将带有Proofreading活性的酶与普通Taq酶(用于提高扩增效率)混合起来,错配率在8-9 X10-6碱基/循环数。Clontech、LTI等公司都有此类产品。如果要求更高的保真度,就要选择单一型的高保真酶,如Stratagene的 Pfu,NEB公司的Vent DNA 聚合酶,错配率5.7 X10-5碱基/循环数;QIAGEN公司新推出的ProofStart DNA聚合酶,兼特异性与保真
操作方法所属实验:PCR 技术
低至单拷贝核酸 qPCR 方案
荧光定量 PCR 技术可以实现 RNA 的相对定量,广泛应用于分子生物学研究及疾病相关研究。QIAGEN QuantiNova PCR 系列可支持包括一步法、多重等多种 qPCR 应用;超快速的反应体系 30 min 即可完成实验及独特的颜色指示方案杜绝加样错误;LNA(锁核酸)技术加持增强引物或探针的灵敏度和特异性。
操作方法所属实验:微量样本核酸
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