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质粒的转化及转化子的鉴定实验

质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。

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质粒转化

将质粒 DNA 导入细菌

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转化

1. 100 ul感受态细胞在冰中融化。 2. 分装2管，50 ul/管。 3. 加入转化的DNA Xul。 4. 冰中放置30 min。 5. 42 ℃放置90 sec。 6. 冰中放置2～3 min。 7. 加入4倍体积的SOC液体培养基或LB液体培养基。 8. 37 ℃振荡培养1 hrs。 9. 涂平板，37 ℃温箱培养12～16 hrs。

操作方法所属实验：含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

高效转化法

，需要 3.0~4.5 个小时。该培养物可用于 10 次转化。5. 用一个灭菌的 50 ml 离心管收获培养物，3000 g 离心 5 分钟。6. 倒掉培养基，用 20 ml 灭菌水重悬细胞，再次离心。7. 倒掉水，用 1.0 ml 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞，并转移到一个 1.5 ml 的微量离心管中。8. 用微量离心机以最高转速离心 15 秒，用微量加样器吸出 LiAc。9. 用 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞，使终体积为 500 μl，于 30℃ 孵育 15

操作方法所属实验：酿酒酵母的 LiAc/ssDNA/PEG 高效转化法实验

问转化菌长的不好

实验问答5836 围观

问请教酵母转化，醋酸锂转化法相关问题

土井挞克树

以下为酵母醋酸锂转化法的步骤：l.于5ml YPD液体培养基中接种酿酒酵母，300C下200rpm过夜振荡培养。2.计数过夜培养的细胞密度，以5x106个／ml的最终细胞密度接种于50ml YPD培养液。3.置300C条件下200 rpm振荡培养至细胞浓度为2x107个细胞_Jml，通常须要3．5小时，该培养物的细胞足够约可用于l0次醋酸锂转化。4.离心，添加醋酸锂

实验问答2 回答2372 围观

转染和转化的区别

物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。转化特指将质粒DNA 或以其为载体构建的重组DNA 导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化

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DNA的转化

摘要：体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术,可获得含重组的阳性克隆. 实验原理：体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术,可获得含重组的阳性克隆.在此阳性克隆中, DNA 可在生物体系中大量扩增,繁殖,保存以及表达目的基因的产物,这是PCR体外扩增DNA所不能替代的.配合DNA重组

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电转化流程

电转化流程适用于（1）转基因（2）基因介导（3）基因修复。

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制备 EBV 转化的 B 细胞

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

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CaCl2转化法

C，1100 g离心5 min。细胞沉淀用10 ml冰冷的CaCl2溶液重悬，冰上放置30min。6. 于4°C，1100 g离心5 min。用2 ml冰冷的CaCl2溶液重悬各管细胞。7. 为了长期保存，按每管250 μl的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中，立即冻存于-70 °C。8. 为检测感受态的效果，按照以下各步骤将10 ng pBR322转化到100 μl感受态细菌。将合适体积的转化物（1、10和25 μl）涂于含有氨苄青霉素的LB平板上，37 °C培养过夜。转化的大肠杆菌MC

操作方法所属实验：质粒 DNA 导入细菌细胞实验

CaCl2转化法

的CaCl2溶液重悬，冰上放置30 min，于4℃，1 100 g 离心5 min。 6. 用2 ml 冰冷的CaCl2溶液重悬各管细胞，然后按每管250 ul 的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中，立即冻存于- 70℃。7. 按照以下各步骤用10 ng pBR322转化100 ul 感受态细菌。8. 将合适体积的转化物涂于含有氨苄青霉素的LB平板上，37℃培养过夜。9. 将10 ng 加入到一个15 ml 无菌的圆底试管中，并放置冰上。10. 将盛有感受态细胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。11

操作方法所属实验：大肠杆菌转化实验

问20000bp的质粒需要怎么转化和摇菌，，，做了一些转化长菌了但是挑菌后摇不起来。

土井挞克树

给你推荐一篇文章，详细介绍了转化和摇菌

实验问答1 回答803 围观

问电转化质粒浓度

balalaLy

质粒浓度一般100ng/ul左右，1:25的体积比例加到感受态中

实验问答2 回答3605 围观

DNA转化及重组子的筛选

相关专题 DNA连接与转化实验目的了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义; 学习外源DNA转化入受体菌细胞并筛选转化子的方法。实验原理转化(transformation)是将异源DNA分子导入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃， CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基

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重组DNA分子的转化

1实验原理 DNA重组分子在体外构建完成后，必须导入特定的受体细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。对于不同的受体细胞，往往采取不同的转化战略。1.1 DNA重组分子的常用转化方法 1.1.1 Ca 2 诱导转化1970年Mandel和Higa发现用CaCl2处理过的大肠杆菌能够吸收l噬菌体DNA，此后不久，Cohen等人用此法实现了质粒DNA转化大肠杆菌的感受态细胞，其整个操作程序为：1）将处于对数生长期的细菌置入0℃

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衣藻的遗传技术(转化)实验

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

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酵母转化实验

转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。这现象首先发现于细菌，也是细菌间遗传物质转移的多种形式中最早发现的一种，它不同于通过噬菌体感染传递遗传物质的转导以及通过细菌细胞的接触而转移DNA的细菌接合。

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电穿孔转化

1)实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 mL YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。2)转化前1天晚上，在装有500 mL YPD培养基的2 L无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过夜，直到细胞密度达1×lO8细胞/mL (OD6这一细胞密度表明细胞处于对数生长的中后期。如果对特定的菌株不知道其精确的生长期，可以用不同体积的饱和培养液接种3个不同的烧瓶（基本方案步骤2)。3)于4℃以4000 g离心收获培养细胞，细胞用80 mL无菌水重悬。为了增加细胞对电击的感受

操作方法所属实验：将 DNA 导入酵母细胞实验

乙酸锂转化

1)在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 mL YPD培养基中，于 30℃恒温摇床，培养过夜达到饱和。2)转化的前一天晚上，往1L无菌烧瓶中加入300 mL YPAD培养基，然后接种适量的饱和培养液，再于30℃培养过夜，到细胞密度为1×l07细胞/mL OD600=0.3〜0.5，依据菌株而定）。为了获得2〜3倍高的转化效率，此时用新鲜的YPAD培养液稀释使细胞密度为2×106细胞/mL，然后培养生长1〜2代（2〜4 h)。因为生长期和细胞密度对获得最佳的转化效率是十分重要

操作方法所属实验：将 DNA 导入酵母细胞实验