转化菌长的不好

用实验室自己制的pentr-t载体，然后用的实验室自己制的dh5α感受态，有连接一小时和过夜的，转化了很多次，但每次都长的不太好。要不就是不长菌，要不就是特别少，就是那种很多小点，然后几个稍微大一点的菌，然后多放一天培养箱，又长出很多小的，不知道后来长出来的是不是假的，挑了长的大的菌做菌p，用载体上的引物和基因上的中间引物，退火温度45度有一次没有条带，还有一次每个都有条带，但是长度不对，后来把退火温度提到50度（最低的一个引物m13r退火温度为45度），出过一次条带，拿去测序反连了，然后后面菌p的没有条带，不知道是加a的问题，因为pcr之后加a纯化了一把，还是连接载体不行，或者感受态不行，做的时候好感受态每管35ml左右吧