质粒的转化及转化子的鉴定实验

实验分类：

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。

来源：丁香实验

操作方法

热激法

1. l mlX-gal(20 mg/ml)，25mlAmp（100 mg/ml），250ml制备选择性培养基平板：在融化的250 mlLA培养基中250mI PTG(200 mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中；2. 取出3管制备好的感受态细胞，放在冰上融化；3. 每100 ul感受态细胞加入约20 ng质粒DNA，3管分别加连接产物、标准超螺旋质粒DNA（阳性对照）及不加入任何DNA（阴性对照

电转化法

1. l mlX-gal(20 mg/ml)，25mlAmp（100 mg/ml），250ml 制备选择性培养基平板：在融化的250 mlLA培养基中250mI PTG(200mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中；2. 取出制备好的感受态细胞，放在冰上融化；3. 连接产物，用移液器轻轻吸打均匀，置冰上；每管感受态细胞加入1 μl4. 电转化仪选择1800 V作为输出电压；5. 将要转化的混合物加入