如何快速鉴定转化子DNA
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快速细胞破碎法实验步骤
1、挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中,37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8.
2、取1ml菌液至1.5ml eppendorf 管中,9000rpm离心9min,去尽上清.
3、加入70μl Cracking Gel缓冲液[1mol/L Tris –HCl(pH6.8)10ml,20%SDS 10ml, 250mmol/L EDTA 1.6ml,蔗糖27.2g, 1.2%溴酚蓝1.67ml,加双蒸水至200ml],混匀后,37℃水浴30min以上.
4、15000rpm离心15min.
5、吸取上清点样电泳,观察.
转化子DNA的酶切鉴定
转化子DNA的快速少量抽提
1) 菌液移至5ml Eppendorf 管中,9000rpm,离心9min,去上清.
2) 加溶液Ⅰ100μl,溶液Ⅱ200μl,溶液Ⅲ150μl,混匀,冰浴10min.
3) 15000rpm离心15min.
4) 吸取上清,加入异丙醇1ml混匀,置室温15～30min.
5) 15000rpm离心15min,弃上清,加入75%乙醇洗涤2次.
6) 离心弃上清,真空抽干,加入适量1×TE溶解DNA.
7) 取少量DNA电泳,观察浓度.
