电转化法

电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。

外源片段与载体的连接产物 大肠杆菌 感受态细胞
X-gal Amp LA培养基 水 抗生素
培养皿 灭菌锅 离心管 摇床

1.  l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（100 mg/ml），250 ml 制备选择性培养基平板：在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中；

2.  取出制备好的感受态细胞，放在冰上融化；

3.  连接产物，用移液器轻轻吸打均匀，置冰上；每管感受态细胞加入1 μl

4.  电转化仪选择1800 V作为输出电压；

5.  将要转化的混合物加入预冷的1 mm的电转化杯中，立即按下按纽电击；

6.  立即加1 ml SOC培养基到转化杯中重悬细胞；

7.  将细胞转入合适的培养管中37 ℃培养1小时；

8.  吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板；

9.  37 ℃培养过夜，观察结果。