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简介
来源:丁香实验
操作方法
1. 在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2. 转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基,然后接种适量的过夜培养液,再于30℃培养过夜,到细胞密度为1×107细胞/ml (OD600≈0.3~0.5,依据菌株而定), 为了获得2~3倍高的转化效率,用YPAD稀释培养液至细胞密度为2×10
原生质体转化1. 在实验前2天,将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中,于30℃培养过夜(如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养)。 2. 转化前一天晚上,从5 ml 过夜培养液中取适量的菌液,接种于盛有50 ml YPD培养基的250 ml 无菌烧瓶中,再过夜培养,使细胞密度达到1~2×107细胞/ml(OD600=0.5~1.0,依据菌株的不同有一定的差别)。 3. 室
电穿孔转化1. 实验前两天,将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中,30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上,在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液,于30℃剧烈摇动培养过夜,直到细胞密度达1×108细胞/ml(OD600≈1.3~1.5,依据菌株不同而异)。 3. 于4℃以4 000 g 离心收获培养细胞,细胞用80 ml
单链高分子量的担体DNA制备1. 将DNA溶于pH8.0的1×TE缓冲液,终浓度为10 mg/ml。于4℃搅拌过夜。 2. 用一个大的超声探头,在75%的满功率下超声处理DNA 30 s,以降低DNA溶液的粘度。取1 μg DNA在0.8%琼脂糖凝胶上电泳,检查超声剪切后片段大小的分布。如有必要,可重复超声处理,直到获得适当的片段大小分布。片段大小范围在2~15 kb之间,平均大小约为7 kb 是合适的。