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微量样本核酸解决方案

专题31 内容 76 订阅

实验动物免疫方案

用免疫学的基本理论和技术来诊断、预防和治疗疾病，并在此基础上开展的采用人工方法向机体输入由他人或动物产生的免疫效应物，如免疫血清、淋巴因子等，使机体立即获得免疫力。其特点是产生作用快，输入后立即发生作用。但由于该免疫力非自身免疫系统产生，易被清除，故免疫作用维持时间较短，一般只有2～3周。主要用于治疗和应急预防。

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DNA 条形码的收集—分析方案实验

生物条形码的兴起表明了人类正积极探索建立一种基于对短的标准化基因区序列多样性的分析来鉴别真核生物的系统。此项工作在动物界研究中发展最快。这里，一个目标基因区域得到了选择（cytochrome C oxidase I， C O I ，细胞色素 C 氧化酶 I)，初步研究证实其可有效地发现和鉴别物种。根据这些有意义的结果，有更多的工作正试图在更大规模上收集此界生物的条形码记录，并发现其他真核生物界的目标条形码区域。在本章，我们将详细描述收集动物界物种 D N A 条形码记录的方案，但是其中很多

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方案一

单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列，即相邻肽段间相差一个氨基酸残基，用质谱分析肽阶梯，通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱，但碎片离子由人工完全解析。用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生，由 C 未端或N未端断裂。测定N末端序列的化学方法应用Edman化学反应，用MS或 MS/MS 读出产生的变短的肽。这一方法通常被称为“阶梯测序＇。在这种方法上发展了两种变化方式。

操作方法所属实验：用质谱数据对肽段从头测序实验

其他方案

用肽质量数据鉴定蛋白质所控制的实验参数中，最具决定性的参数是肽质量测量的精确度。质量精确度越高，结果判定越可信。另一决定性参数是所用酶（或化学试剂）的专一性。酶越纯，专一性胞高，检索结果可信。常用的酶是胰蛋内酶。但是要注意的是，即便是高纯度的胰蛋白酶也会在非 Lys, 或 Arg 的氨基酸残基 C 端酶切（其后不是 Pro) 。所有蛋白酶都存在的问题是，如果蛋白序列中有 2个或更多个连续氨基酸残基是酶的切点，蛋白酶会对底物酶切小完全，留下漏切的位点和不完全的未端，许多检索程序把酶切的位点

操作方法所属实验：肽质量检索实验

问求一份滑膜提原代的方案

Dr_劉医生

讲一下我自己操作的大致方法：细节可以结合自己的操作完善1. 取组织后剪碎，加入α-MEM洗3遍；2. 加入一型胶原酶（2：1）进行消化，常温120分钟，充分混匀。3. 半小时收集第一次细胞，过滤一次，然后2000rpm 离心6分钟后，取官底物质再次消化。4.一个小时收集第二次细胞，重复第3步的操作5.取细胞放入10%胎牛血清中，接种到培养皿培养，2天换液一次即可。

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问求内皮tip cell诱导分化方案

loveliufudan

人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 诱导分化为 tip cell 一直未获成功可能是由于多种因素导致的。下面是一些可能的原因：1.培养条件不当：tip cell 的分化需要较低氧气水平和较高细胞密度。2.培养基成分不当：tip cell 的分化需要特定的成分如血管内皮生长因子 (VEGF) 。3.细胞源问题：不同的细胞源可能会对分化结果产生影响。4.分化方法问题：tip cell 的分化需要特定的分化方式，如分化时间长短，分化过程中细胞培养条件变化等。建议阅读最新的研究论文，了解最新

实验问答2 回答371 围观

微量 RNA 提取方案

从微量样本中分离 RNA，微量样本包括：微量细胞样本如低至 1 个细胞、流式分选细胞（FACS）样本；微量组织样本如低于2 μg的组织样本如穿刺样本（FNA）、激光显微切割（LMD）样本等。

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流式实验常见问题及解决方案

1.无染色/弱染色 2.高背景/非特异性染色 3.染色异常情况

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qPCR 常见问题

专题51 内容 2756 订阅

使用 Trizol 纯化 RNA 实验

RNA 分离的酚基试剂的生产以 Chomczynski 方案为基础。这些方案在从富含 RNA 酶的组织如胰腺中获取 RNA 时最有用。这里介绍的是随 Invitrogen 的 Trizol 试剂出售的方案的摘要，经 Invitrogen 允许做了修改。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

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小鼠角质细胞的分离和培养

该方案根据 Hennings 等（1980) 的力法改进而来。妊娠期 BALB/c 小鼠可从 Harland Sprague Dawley 购得，该方案也适用于原代大鼠角质细胞的分离。

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方案二

第二种方法，也称为"nested peptide secquendng", 是在一个 Edman 降解循环中多次加入多肽/蛋白质底物心在此法中加入过量易挥发的 Edman 试剂以使反应完全，每一循环中的过显试剂可通过蒸发被除去。经 MALDI-MS 分析得到肽序列阶梯，实现阶梯测序。这两种方法都需要底物蛋白质为自由 N 末端，并且不能分辨同质异核氨基载残基亮氨酸和异亮氨酸谷氨酰胺（残基质量 128. 13) 和赖氨酸（残基质量 128. 17), 在CID 谱中很难分辨，但在这两种方法中可

操作方法所属实验：用质谱数据对肽段从头测序实验

方案优化

除了人工解析碎片离子谱外，还有两种基本检索手段用于匹配数据库中序列产生的碎片离子谱。第一种方法依靠人工解析部分谱图来鉴别某一特定系列 (b 或v) 离子的连续离子元素（例如鉴别出相互之间相差一个氨基酸残基质量的碎片离子），解析出部分序列信息，再结合以下参数：①鉴定出的系列中第一个离子的质量数；②肽段质量与最后一个离子质量之差（这两个质量数限制了此序列两端未知残基的总质量），③此完整肽段的质量，④所用蛋白水解酶的酶切持性（在 N 端 'C 端都切还是只切一端）。这五种信息组成了肽序列标签

操作方法所属实验：未解析碎片离子的检索实验

问RAW264.7细胞的M2极化方案

Eason老歌迷

具体可以参考这篇文献”RAW264-7细胞M1_M2亚型的诱导和鉴定”，他讲的不错。

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问生物成像操作步骤及方案

秋秋欣欣

1. 将麻醉的小鼠放入成像箱并关门。2. IVIS Acquisition Control Panel 选择成像模式: Luminescent (生物发光)或Fluorescent(荧光)。3. 选择曝光参数，默认值为Auto(注:也可手动调节成像参数，包括ExposureTime 曝光时间，Binning，f/stop 光圈)。4. 勾选Photography，Overlay和AlignmentGrid选项。5. 选择成像视野大小:ABCD。A适用于小鼠局部成像，D可同时成像5只小鼠

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微量RNA建库测序方案

RNA测序 (RNA Sequencing，简称RNA-Seq) ，是基于高通量测序技术的转录组学研究方法，可以快速对基因组中的RNA种类和数量进行分析，揭示特定生物学或疾病发生过程中的分子机制。

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微量DNA建库测序方案

很多研究人员面对不足1 ng的样本往往束手无策，实际上随着生物技术和酶活性的进步，目前的技术已经可以针对10 pg样本进行全基因组建库（如需对DNA进行打断则最低起始量为20 pg）。

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从石蜡包埋固定的组织中制备 RNA 实验

该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

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DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议，请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

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