生物成像操作步骤及方案

1. 将麻醉的小鼠放入成像箱并关门。

2. IVIS Acquisition Control Panel 选择成像模式: Luminescent (生物发光)或

Fluorescent(荧光)。

3. 选择曝光参数，默认值为Auto(注:也可手动调节成像参数，包括Exposure

Time 曝光时间，Binning，f/stop 光圈)。

4. 勾选Photography，Overlay和AlignmentGrid选项。

5. 选择成像视野大小:ABCD。A适用于小鼠局部成像，D可同时成像5只小鼠。

6. 选择小鼠成像高度(Subjectheight)为1.50cm。

7. 选择激发(Excitation Filter)和发射(Emission Filter)滤光片。

8. 注:生物发光成像 Excitation Filter 选择 Block，Emission Filter 选择 Open。

9. 点击Acquire按钮获取成像图片。

10. 获取图片后，点击 Tool Palette 中的 ROI Tools，选取 Circle，Square，Free Draw 或

Grid 进行 ROI 圈选。

11. 点击 Measure ROIs，获取 ROI 区域的定量数值。

1) SPF级 BALB/C裸鼠，5～8 周龄，18～20克，自由进食、水。饲养1周后接种细胞，分组或混编分笼饲养。12小时光照/日,明暗交替。相对湿度50%±10%、温度23±2℃。

2) 细胞培养瓶中培养CNE-1细胞（实验室根据具体情况），取对数生长期，胰酶常规消化,离心，富集，利用无菌PBS清洗细胞，离心，富集，重复上述过程3次，最后用无菌PBS液调整细胞浓度为l×107个/ml，收集细胞于离心管内。

3) 细胞接种取0.1ml CNE-1细胞悬浮液接种于每只小鼠的双后肢大腿。根部皮下，双后肢皮下注射相同肿瘤细胞数，每处1×106个细胞。

4) 成瘤观察继续饲养，观察细胞接种后的生长状况，大约5-6天后可见瘤块，待约1-2 周后，肿瘤长至约0.5-0.8cm直径，开始做体内多肽靶向实验。

希望对你有用

1，配制底物荧光素溶液和注射实验动物：

1）材料：D-荧光素（sciencelight luc001）

DPBS, W/O Mg2+, Ca2+

0.2um 针头滤器

注射器

2）新鲜配制15mg/ml荧光素DPBS溶液，过0.2um除菌滤器。

3）注射实验动物，用量为10 µl/g 体重，即150mg荧光素/kg体重。例如，对于10g体重小鼠，注射100ul，即1.5mg荧光素。

4）腹腔注射后10-15分钟后用成像系统观察。

注意事项：

荧光素溶液可先配制成200倍浓缩液置于-20℃保存，使用前稀释到15mg/ml。

对同一只小鼠来说，注射不同量的荧光素，发光强度不同，随着荧光素注射量的增多，发光增强。

一般来说，荧光素腹腔注射老鼠后约一分钟后表达荧光酶的细胞开始发光, 十分钟后强度达到最高。 在最高点持续约20-30 分钟后开始衰落, 约三小时后荧光素排除, 发光全部消失，所以最好的检测时间是在注射后15到25分钟之间.但需要注意的是，对于不同的动物模型，发光动力学过程并不完全一致，最好先进行预实验确定何时发光信号最强。

荧光素注射位置最好选在左下腹部，对于非刺激性溶液，小鼠可很好地耐受1ml。

2，麻醉实验动物

可采用异氟烷（isoflurane）或克他命/甲苯噻嗪（ketamine/xylazine）混合液麻醉实验动物。对于采用异氟烷麻醉动物，方法如下：

1) 称量异氟烷吸收过滤器的重量，看是否必要更换过滤器。当过滤器过重时，吸附物过多，应及时更换；

2）确保氧气供应已切断，将蒸发器面板调至“OFF”位置，向蒸发器腔内注入异氟烷，不要超过最大刻度指示线；。

3）打开氧气罐阀门，保证压力为55psi左右；

4) 将氧气流速调为1L/min；

5）将动物放入麻醉仓，盖好盖子；

6) 打开麻醉仓管道阀门（确保麻醉多支管阀门处于关闭状态）；

7）将蒸发器面板刻度调到3％（动物在1-2分钟后就会被麻醉）；

8）当动物对轻晃麻醉仓无反应时，将蒸发器面板刻度调到1.5-2％；

9）将麻醉多支管阀门打开。

10）迅速打开麻醉仓，取出实验动物，将圆锥吸入器套上。

11）关闭麻醉仓管道阀门。

12）开始进行成像操作或接种细胞。

操作步骤：

1. 光源选择

在光学生物成像实验中，光源的选择对成像效果有直接影响。常用的光源有激光器、白炽灯和LED光源等。不同的光源具有不同的发光特性和光谱特性，应根据实验需求进行选择。

2. 光路设计

光路设计是光学生物成像实验中至关重要的一步。合理设计的光路可以排除干扰和噪声，提高成像质量。在设计光路

第 2 页

时，应尽量减少光线损耗和散射，保证足够的光线能够到达检测器。

3. 对比度增强技术

在光学生物成像实验中，对比度增强技术可以显著改善成像效果。常用的对比度增强技术包括增加样品的反射率、调整光源的亮度和改变成像角度等。通过合理运用这些技术，可以获得更清晰的生物成像图像。

1.

系统启动:打开电脑主机和监视器;打开IVIS成像系统;当电脑显示桌面后,打开活体成像软件;按照提示输入用户ID(最多三个字面),然后点击“Done”;点击镜头控制面板的“Initialize”按钮初始化系统;等待系统进行初始化,可以听到马达运转的声音和看到系统状态显示发生变化;等待镜头达到它的工作温度,(参看“工作温度”)直到镜头控制面板上绿灯亮;此时镜头温度被锁定在工作温度-105℃,可以进行操作了

2.

在成像暗箱门下方是平台加热控制按钮,停止按钮,手动光照控制按钮和镜头状态指示灯。具体操作如下: 平台温度控制器:改变平台的温度,并且可以显示平台摄氏温度或华氏温度。平台温度预设为37℃,按下“set”按钮可以看到平台的实时温度,持续按住“set”按钮的同时按上下按钮可以改变平台温度,注意:如果改变的幅度过大,平台可能最多需要45分钟。