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DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议,请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源:丁香实验

操作方法

DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

材料 缓冲液和溶液 贮存液、缓冲液和试剂的组成请参见附录 1。贮存液需稀释到适当浓度。 细胞匀浆缓冲液 10 mmol/LHEPES-KOH(pH7.9) 1.5 mml/LMgCl2 10mmol/LKCl 0.5 mmol/LDTT 0.5 mmol/L 苯甲基磺酰氟 含 0.05%(V/V)NonidetP-40 的细胞匀浆缓冲液 细胞重悬缓冲液 40 mmol/LHEPES-KOH

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