於紫槐中药
最近要提取滑膜成纤维细胞,买了二型胶原酶,有没有已经做过的前辈分享一下经验啊🙏之前用0.25%的胰酶消化40分钟,然后完全培养基终止消化,过滤,1500r/min离了5分钟,然后重悬,但是显微镜下没看到细胞,感觉全是油滴😂
Dr_劉医生
讲一下我自己操作的大致方法:细节可以结合自己的操作完善
1. 取组织后剪碎,加入α-MEM洗3遍;
2. 加入一型胶原酶(2:1)进行消化,常温120分钟,充分混匀。
3. 半小时收集第一次细胞,过滤一次,然后2000rpm 离心6分钟后,取官底物质再次消化。
4.一个小时收集第二次细胞,重复第3步的操作
5.取细胞放入10%胎牛血清中,接种到培养皿培养,2天换液一次即可。
於紫槐中药
大概几天才能看到细胞的形态呢?我刚提完之后看发现镜下都是油滴,区分不出哪些是细胞
土井挞克树
你消化的时间太长了,可以减少消化时间。