人类原代滑膜细胞传代

我养过人类原代滑膜细胞，探讨传代经验：

其实最好还是在细胞长满时、还没有接触性抑制之前传代为好

1、预温0.25% trypsin， 0.02%EDTA

2、用Ca－free的PBS洗涤贴壁细胞三次

3、用1份0.25% trypsin， 0.02%EDTA和3份PBS室温下消化（不要用全量消化液因为对于细胞的悬浮作用不但未见有增强作用而且对细胞本身没有好处）

4、在倒置显微镜下观察细胞悬浮情况，约有半数以上细胞开始漂浮就用移液管（滴管）移出，置入离心管中

5、离心1000rpm，10min

6、上清液移回培养瓶中继续消化瓶中的剩余未悬浮细胞

7、 离心管底细胞用RPMI1640重悬浮，离心1000rpm，5min去上清

8、再用10%胎牛血清的RPMI1640洗涤离心一次

9、计数后接种到新的培养瓶中

10、未传代的培养瓶中的细胞＋消化液一起移入离心管中，用RPMI1640和10%胎牛血清的RPMI1640冲洗培养瓶各一次并将液体一并移入离心管中，吹打2次

11、离心1000rpm，5min去上清，再用10%胎牛血清的RPMI1640洗涤离心一次，计数后接种到新的培养瓶中（这样就像分次收集法，如有污染也不会全军覆没）

12、如细胞量不够或想尽快做完实验去玩，留住未传代的培养瓶加上全培去培养，因为瓶底还有细胞没有被消化下来，这些细胞贴壁能力强增殖活力也强