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小胶质细胞原代培养实验
来源:《神经生物学实用实验技术》第四军医大学出版社
实验概况收录 1 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章
基本方案
1按照培养少突胶质细胞的方法,待10d后细胞分层生长。显微镜下可见满视野圆形、折光性强的小胶质细胞,附着在贴壁生长、紧密连接在一起、铺满培养瓶的星形胶质细胞层上面,甚至可见许多圆形小胶质细胞飘落在培养液中,此时可以开始纯化。2.将培养瓶固定到37℃恒温摇床上,80-200r/min,振摇2h左右。3收集振摇下来的小胶质细胞,种植到多聚赖氨酸包被的培养皿中,加入新的含10%胎牛血清的DMEM培养基继续培养,每2-3d换液1次。4.小胶质细胞在体外较难进一步分裂增殖,但如果根据实验需要传代
操作方法所属实验:小胶质细胞原代培养实验
基本方案
于多聚赖氨酸包被的T75的培养瓶中,混匀后放入37℃,5%CO2的孵育箱内培养。2.接种2d之内尽量不要晃动培养瓶,培养4d后开始全量换液,以后每3d全量换液1次并注意镜下观察细胞融合度。3培养至第7-9天时,星形胶质细胞已铺满瓶底,并且可见其上层有胞体小、折光高、有小突起的少突前体细胞出现,此时可以开始纯化细胞。4先用摇床除去处于半悬浮生长的小胶质细胞(200r/min,37℃,约20min),然后快速全拯换液。5换液过夜稳定后继续用摇床分离少突前体细胞(280r/min,37℃),18-20h
操作方法所属实验:振荡摇床法纯化培养少突胶质细胞实验
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小胶质细胞

用碳酸银浸镀法显示的小胶质细胞是中枢神经系统中最小的一种胶质细胞。细胞体呈细长或椭圆,从胞体发出细长而有分支的突起,表面有许多小棘突。常规染色见核细长或三角形,染色较深。电镜下小胶质细胞染色深,核扁平或锯齿状,胞质内溶酶体较多。小胶质细胞数量少,约占全部胶质细胞的 5 %。此细胞是定居在脑内的吞噬细胞,在炎症刺激下,其抗原性增强,形态伸展,功能活跃。小胶质细胞在脑内各部分均有分布,在灰质中的数量比在白质中的多 5 倍。海马、嗅叶和基底神经节的小胶质细胞比丘脑和下丘脑的多,而脑干与小脑中

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Nat Metab:浙江大学高志华 / 段树民课题组揭示Ⅱ型己糖激酶调控小胶质细胞功能的新机制

2022 年 12 月 20 日,浙江大学医学院脑科学与脑医学学院高志华教授与段树民院士团队在 Nature Metabolism 在线发表题为 Dual roles of hexokinase 2 in shaping microglial function by gating glycolytic flux and mitochondrial activity 的工作。该研究揭示小胶质细胞特异高表达的Ⅱ型己糖激酶(Hexokinase 2,HK2)在调控小胶质细胞生理和病理功能中的双重

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视神经横断模型及荧光金逆行标记
不一;其分布由中央向周边部逐渐稀少;在损伤2d后逐渐开始出现标记的小胶质细胞,为吞噬了死亡的节细胞而成金黄色,其形态为胞体细长,形态不规则,较易与节细胞区分开来。
操作方法所属实验:视神经损伤模型实验
​实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型
固定,纵向包埋,常规石蜡切片。(3)染色与观察苏木精-伊红染色观察Lewis大鼠脑和脊髓神经组织切片淋巴细胞、巨噬细胞等炎性细胞的浸润情况。可见脊膜及中央管周围有明显的淋巴样组织浸润、增厚,脊髓白质内有细胞浸润的小灶状病变及静脉周围呈套袖样浸润。神经细胞有坏死,细胞核消失呈匀质小体,或细胞体消失留下一空隙,以及细胞周围有圆细胞浸润等。在脑组织中可见到脑膜增厚,淋巴样细胞及单核细胞浸润。室管膜及脉络膜亦呈同样变化。小静脉及毛细血管周围,则呈套袖状细胞浸润。脑实质内有小胶质细胞组成的浸润灶。有些星状
操作方法所属实验:神经系统免疫性疾病模型制作实验
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小鼠原代小胶质细胞吞噬功能的分析

实验步骤   为了检测小胶质细胞的吞噬功能,利用凋亡的神经祖细胞作为目标,因为在体外环境下它能最模拟自然条件下小胶质细胞的吞噬目标。 1. 将神经祖细胞(NPC)置于0.1M PBS 2mg/ml木瓜蛋白酶(Worthington)溶液中进行分离,37ºC作用30min。 2. 将分离的NPC 在紫外光下处理15-20min。 注:此步应该在一个很薄的塑料培养皿中进行,厚的塑料(如15或50毫升锥形管)将阻止

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流式细胞术急性分离小鼠小胶质细胞

gate,选择活细胞,然后依据脉冲宽度与面积比选择线性分布细胞,依据前向散射与侧散射比来消除碎屑。然后依据不同细胞类型的相应标记来获得等效和准确的细胞计数。 小胶质细胞分离流程示意图,如图1

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酶消化法
基重悬,调整细胞密度至1.5x106/ml,种植于75 cm2 培养瓶。 6. 经1 小时差速黏附去除成纤维细胞后,将细胞悬液转移到一新的75 cm2 培养瓶继续培养,两天换液一次。 7. 7 天后将培养瓶放入水平摇床(260 rpm,2 h,37℃),换液弃除小胶质细胞,放入培养箱平衡1 小时,重新置于水平摇床18 h。 8. 换液弃除少突胶质细胞,用新鲜培养基洗2 遍,加入0.25%胰蛋白酶与0.02% EDTA 1:1 混合液消化、传代备用。 二、 形态学观察倒置相差显微镜下观察细胞形态和生长
操作方法所属实验:大鼠星型胶质细胞培养实验
基本方案
1嗅鞘细胞位于嗅球表面两层即嗅神经层和小球层,嗅球每层结构间的差别并不十分明显,即使是在解剖显微镜下取材也难以绝对完整地分离。因此,培养物中可能混有某些杂细胞,主要为来自于血管、软脑膜等结缔组织的成纤维细胞,也可见少量星形胶质细胞、小胶质细胞、神经元等。显微镜下取材应尽可能仔细地清除外层的软脑膜,可显著减少成纤维细胞的数量。2.原代培养的成年动物嗅鞘细胞的初始形态较为特殊,呈不规则颗粒样,似“煎蛋”形或花朵状。初学者常误为培养失败,建议耐心观察5-7d后,就会发现细胞逐渐呈典型形态。3.目前
操作方法所属实验:嗅鞘细胞的原代培养实验
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社交能力还和肠道有关?新研究揭示肠道菌群如何控制大脑和社交行为

by modulating microglial remodeling of forebrain neurons 的研究性论文。该研究发现了肠道微生物会影响斑马鱼的社交行为,并找到了将肠道微生物群与大脑中社交行为相关神经元联系起来的途径。 在健康的鱼体内,肠道微生物会刺激一种叫做小胶质细胞的细胞,去修剪神经元之间多余的连接。修剪是健康大脑发育的正常部分。就像柜台上的杂乱一样,额外的神经连接会妨碍真正重要的神经连接,导致信息混乱。在没有这些肠道微生物的斑马鱼中,修剪没有发生,斑马鱼则表现出社会交往的缺陷。 图片来源

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Nat Metab:母亲孕期高脂肪饮食,为啥会增加男性后代的抑郁风险?

素的前体物质),可以恢复雄性后代的大脑血清素水平和对糖水的偏好。 图片来源:Nature Metabolism 但是为什么母亲在怀孕时的脂肪堆积会导致后代的血清素降低呢?为了解决这个问题,研究小组进一步探索了大脑的常驻免疫细胞:小胶质细胞。作为常驻中枢神经系统的免疫效应细胞,小胶质细胞为大脑提供了一个动态和高效的监测系统,可以通过吞噬作用清除细胞碎片。 研究人员用 3D 成像分析了小胶质细胞的吞噬物内容,发现与标准饮食的母鼠所生的雄性后代相比,由高脂肪饮食母鼠所生的雄性后代的小胶质细胞中含有

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