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RNA 原位杂交实验
原位杂交（msituhybridization，ISH)，也称作杂交组织化学或细胞学的杂交，是一种能够从形态学上证明特异性的 DNA 或 RNA 序列存在于制备的个别细胞、组织部分、单细胞或染色体中的技术。原位杂交是研究异质细胞群中 DNA 和 RNA 序列的细胞定位的唯一方法。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。
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5.7 RNA 原位杂交
1.3 μl 冰乙酸，20 μl 3 mol/L 乙酸钠（pH 5.2 )，2 μl 10 mg/ml 酵母 tRNA，500 μl 乙醇，于 -20℃ 至少放置 2 h 以沉淀 RNA。(4) 于微型离心机上用最高速度离心 15 min 沉淀 RNA，弃上清液。(5) 用 70% 乙醇淋洗沉淀，保持 -20℃：离心 5 min，弃上清液。(6) 用灭菌水溶解 RNA 探针，并调整 RNA 探针浓度为杂交所需浓度的 10~20 倍，于 -20℃ 保存。3. 组织及细胞的预处理用于原位杂交的所有组织可用
操作方法所属实验：RNA 原位杂交实验
原位杂交实验要求及步骤
（一）取材、冰冻切片：将动物以3%戊巴比妥钠麻醉，打开胸腔，暴露心脏，刺破右心耳，将针尖刺入左心室用生理盐水灌注（灌注量约为动物体重的2倍），再注入等量的4%多聚甲醛。（见图2-7）。取材，置于4%多聚甲醛中后固定4hr。以0.1M PBS浸泡冲洗4-5次（换液：1次/hr）。将组织块入30%蔗糖/0.1M PBS液（4℃），1-2天后冰冻切片，将切片裱贴于原位杂交专用玻片上，切片厚度为15-20μm。（二）探针制备与检测（定量）：1. 随机引物制备cDNA核酸探针以DIG DNA 标记检测
操作方法所属实验：原位杂交实验要求及步骤
实验问答122 围观
原位杂交组织化学基本程序
原位杂交组织化学基本程序 根据所用探针的种类和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA－DNA杂交，DNA－RNA杂交和RNA－RNA杂交三类。因原位杂交多用于检测组织细胞内的mRNA及其表达，故DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交较多见，DNA-DNA杂交主要用于染色体原位杂交以对染色体中的DNA进行定位。 根据探针的标记物是否能直接检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。在直接法中。探针用放射性核素、荧光素或一些酶标记，探针与组织细胞内靶核酸所形成的杂交体可分别通过放射自显影、荧
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电镜原位杂交技术实验
电镜原位杂交实验可以用于：（1）研究特定核苷酸序列的亚细胞定位；（2）许多研究者已经从光学显微观察扩展到对超微结构的观察。（3）特别是利用地高辛或生物素作为报告分子的非放射性探针，不必像放射性探针那样需要长时间暴露，因此整个过程可以在 24 h 内完成。
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间接原位 PCR（原位杂交PCR）
与直接原位PCR所不同的是，靶基因在扩增时不进行标记基团的掺入，而是标记一段与扩增片段互补的探针，在扩增结束后，应用此探针进行原位杂交。因此，此处主要介绍原位杂交，其余方法同原位PCR。
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荧光原位杂交
1a)石蜡切片或细胞的杂交，对载玻片进行脱蜡、水化、 封闭和脱水处理。将标本晾干（或在干燥器中干燥），随后储于加有干燥剂的载玻片盒中，置-70℃过夜。至关重要的是标本在储放前应绝对干燥。1b)冰冻切片的杂交：进行切片的预处理和乙酰化处 理，随后进行切片的脱水。标本绝对干燥至关重要，此时切片即可用于杂交（步骤3)。杂交应马上进行。2) 对每一杂交实验，可用乙醇沉淀10〜15 ng探针，重溶于10μL去离子的甲酰胺中， 加5μg (0. 5μL)超声处理的鲑精DNA,在70°C〜80°C温度
操作方法所属实验：用非同位素探针进行原位杂交和检测实验
电镜原位杂交技术实验
充满 2.3md/L 蔗糖或是蔗糖/甲基纤维素混合液。8.用接种环收集切片后，让它们短暂解冻，并立即转移到筛网上。9.用蔗糖/甲基纤维素混合液收集切片有两个优点，一是形态结构保持得更好更完整，二是筛网在冰箱中至少能储存 3 个月。10.用透明塑料包被或碳包被的镍网；铜网在处理过程中会氧化，形成肮脏的沉淀，从而干扰电镜成像。五、电镜原位杂交步骤将筛网（切片面朝下）放到含有 2% 明胶溶液的带盖培养皿上，在电热板上 (37℃) 放置 5 min，然后在 37℃ 孵箱内放置 20 min。以下
操作方法所属实验：电镜原位杂交技术实验
实验问答356 围观
原位杂交组织化学杂交体检测
原位杂交组织化学杂交体检测 杂交体检测又称杂交体显示，是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体(杂交信号)成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。 (一)放射性核素标记探针的检测 第一个原位杂交实验(1969年)以’H作为核酸探针的标记物，杂交信号用放射自显影术检测。随着原位杂交技术的推广和应用，32P、125I及35S等放射性核素均可用来标记探针，放射自显影技术也一直是用于杂交信号检测的手段之一。 放射
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核酸原位杂交
核酸原位杂交是用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细胞级或组织切片中核酸进行复性杂交并对其实行检测的方法，称为核酸原位杂交（nucleic acid hybridization in situ）。用来检测DNA在细胞核或染色休上的分布，与细胞内RNA进行杂交以研究该组织细胞中特定基因表达水闰；还用于细胞、组织中有无特异性菌、病毒检测的研究。 核酸原位杂交的优点是特异性高，可精确定位；能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响；不需要从组织中提取核酸，对于组织
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荧光原位杂交实验
荧光原位杂交可应用于：（1）动植物基因组结构研究；（2）染色体精细结构变异分析；（3）病毒感染分析；（4）肿瘤遗传学和基因组进化研究。
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间接原位PCR（原位杂交PCR）
一、预杂交 1. 试剂与配制 2×SSC 50%去离子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v） 预杂交液：2×SSC，5%硫酸葡聚糖，50%甲酰胺，0.2%脱脂奶粉 2. 操作方法 （1）在进行完原位PCR扩增后，用2×SSC预浸经乙醇脱水、空气干燥的玻片，并简洗15 min； （2） 用50%去离子甲酰胺37℃孵育15 min； （3）加预杂交液20 μl/片，在杂交温度下孵育30 min～2 h。 二、杂交 1. 试剂与配制 杂交液：50%去离子甲酰胺，5×SSC，10%硫酸葡聚糖
操作方法所属实验：间接原位 PCR（原位杂交PCR）
非洲爪蟾的整体原位杂交
1) 在2%半胱氨酸，pH 7.8的溶液中培养非洲白化爪蟾的胚胎3〜10 min以除去胚胎外的胨胶层。2) 将胚胎转移到5 ml螺旋盖玻璃小瓶中，等胚胎沉淀后，移去大部分的液体，并向小瓶中加入MEMPFA缓冲液。室温下培养30 min并轻轻摇晃以固定胚胎。3) 用PBS取代MEMPFA缓冲液室温下洗3次，每次30 min。4) 依次用50%、70%和100%甲醇室温下使样本脱水，每种溶液浸泡10 min。5) 室温下用100%甲醇洗3次，每次10 min。-20℃保存。6) 依次加入1 ml
操作方法所属实验：RNA 在脊椎动物的胚胎和器官中的整体标本原位杂交和检测实验
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