间接原位 PCR（原位杂交PCR）

实验分类：

PCR 技术

最新修订时间：2022-05-19

简介

与直接原位PCR所不同的是，靶基因在扩增时不进行标记基团的掺入，而是标记一段与扩增片段互补的探针，在扩增结束后，应用此探针进行原位杂交。因此，此处主要介绍原位杂交，其余方法同原位PCR。

来源：丁香实验

操作方法

间接原位PCR（原位杂交PCR）

一、预杂交 1. 试剂与配制 2×SSC 50%去离子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v）预杂交液：2×SSC，5%硫酸葡聚糖，50%甲酰胺，0.2%脱脂奶粉 2. 操作方法（1）在进行完原位PCR扩增后，用2×SSC预浸经乙醇脱水、空气干燥的玻片，并简洗15 min；（2）用50%去离子甲酰胺37℃孵育15 min；

间接原位 PCR（原位杂交 PCR）

一、试剂配制（1）4％多聚甲醛固定液，2% AES 溶液；（2）蛋白酶K：储存液-用灭菌水溶解蛋白酶 K 粉末至 1mg/mL，-20 °C 贮存；工作液-现用现配，使用 PBS 稀释 150 倍；（3）PCR 缓冲液（10x）500 mmol／L KC1,100 mmol／L Tris-HCl（pH 8.4）， 15 mmol/L MgCl2，0.5% Tween20，1 mg/L BSA；（