NF-kB信号通路被激活后......
草梅若雪
各位老师、同仁好！
请教一个问题：
我在做基础实验，发现一个问题：某基因在乳腺癌细胞中高表达，经基因芯片发现高表达基因后NF-kB信号通路被激活了。WB实验验证后发现高表达基因后IKBalpha和p65的磷酸化水平升高了，用通路抑制剂处理后，结果相反。结论：高表达基因后NF-kB信号通路被激活了。
接下来反复做了2个月的MTT实验，检测发现细胞并未增殖。为什么？？？？所有的参考文献不是说激活NF-kB信号通路，癌细胞就会增殖！为什么我做不出来？？？请问需要从哪个角度解释不增殖的原因呢？能不能推荐几篇权威的参考文献。非常感谢。
4 个回答
dxy_uvsexwc5
可以再其他乳腺癌细胞系中做下实验看看
神乎其神
从前期工作看该基因和nf kb相关性很高，该基因高表达nfkb高，nf kb低表达，该基因也低表达，后面出现问题，那么最开始那一步可能要看看原来工作有没漏洞，比方说高表达该基因还有哪些基因也有高表达，另外就是mtt的实验需不需要其他诱导成熟的细胞因子，在mtt前nfkb激活的量，血清培养基的状态,因为nfkb本身也是可以诱导细胞死亡，还有看看在实验时是否满足癌细胞在体内的TME。这些都要考虑，可以考虑跑次wb或者elisa看看tnfa结果再看看。
loveliufudan
原因可能有以下几点:
1. NF-kB通路的激活并不一定立刻导致细胞增殖,可能需要一定的时间积累效应。2个月MTT实验期限可能还不足以观察到显著的增殖趋势。
2. NF-kB通路激活后的下游作用可能受其他信号通路或细胞内环境的影响和调控,单独激活NF-kB可能效果不明显。需要观察其他增殖相关通路变化。
3. 不同癌细胞类型对NF-kB通路激活依赖性不同,仅激活NF-kB可能不足以推动特定癌细胞的增殖。
4. 细胞培养环境差异也可能影响结果,是否有重复在体内动物实验验证?
5. 您的高表达基因是否具有其他未知的下游作用,导致一定的抑制效应?
我推荐几篇相关高质量参考文献:
1. NF-kB in cancer: a matter of life and death. Nat Rev Cancer. 2015 Aug;15(8):469-80.
2. NF-κB Signaling in Cell Senescence. Cells. 2019 May 10;8(5):474.
3. NF-κB in breast cancer: Role and therapeutic potential. Adv Biol Regul. 2019 Jul;71:95-105.
4. NF-κB signaling in tumor cell EMT and metastasis. Oncotarget. 2017 Oct 31;8(56):95197-95203.
于小鱼鱼1998
体内实验与体外实验是存在区别的，体外实验由于实验环境单一，有时候通路被激活肿瘤也不一定增殖，可以延长刺激时间，看肿瘤是否有增殖倾向
