RAW264.7细胞复苏后越养越少，各位大佬帮帮忙看看是什么情况

这是一个需要密集性生长的细胞，这个密度不够很容易挂掉

可能是细胞存在污染，建议清除污染。

你这个细胞明显没有贴壁啊，建议用好一点的培养基，培养时间适当延长一点，如果不行，复苏新的细胞吧。

细胞刚复苏生长缓慢，换液后减少可能为细胞贴壁较差或者死亡导致换液时随培养液丢失，建议延长培养时间。也可能是细胞培养液的问题，建议更换试试。

可以添加血清然后养一养，排除一下污染

1原因:RAW264.7对空间一分敏感，复苏密度太高，细胞增殖太快，加剧细胞营养缺失，加速细胞老化。解决办法:T75培养瓶复苏细胞数量控制在104~105

2原因:支原体污染会导致细胞生长缓慢，甚至难 不

壁

解决办法:定期进行支原体检测，如发现支原体污染，即刻使用支原体去除试剂

复苏后，细胞会出现存活率低的原因是：

1.细胞降温速度欠佳

2.细胞冻存量过低

3.复苏时处理速度太慢，复苏过程不当

遇到这种情况如何处理呢：

1.严格按照程序降温步骤

2.确保冻存细胞量足够

3.复苏过程要迅速