为什么出传代的细胞种皿总是生长不均匀？

一般的孔板，传入细胞以后，要八字混匀或十字混匀的，如果不是混匀问题，就是你胰酶消化的不均

铺板之前先加培养基将培养板底部润一下，打完细胞上下左右晃一下，培养基不能太少，拿到培养箱的过程不要倾斜，也可以放下之后在培养箱中再轻晃几下

因为你在吹打的时候没有把他吹散

应该是你细胞没混匀，皿要轻柔的多晃一下

1.尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。我见过有些刚进实验室的师弟师妹，一上来就加1-2ml胰酶，结果细胞团大片脱落，虽然有后续吹打步骤，但我觉得效果不佳。至于难消化的细胞，怎么掌握分寸，还待自己摸索或其他战友分享。
2.细胞吹匀，这步比上述提到的十字移动等更为重要。如传代1:4 ,可以收集所有细胞至离心管，加入培养液重悬混匀，吸管缓慢吹打20-30次，可配合水平摇晃离心管。
3.培养液的量也有讲究，如6孔板中你最终加入2ml细胞悬液，尤其像这样的小面积培养皿，液体表面有张力，细胞易于聚集在中间，所以我一般6孔板再加1ml以消除影响，吸管缓慢吹打15-20次左右继续混匀。