怎么把基因的启动子克隆下来呀

利用启动子探针载体筛选启动子

启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体，包含2个基本部分：转化单元和检测单元。其中，转化单元含复制起点和抗生素抗性基因，用于选择被转化的细胞；检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。

要克隆基因的启动子，可以按照以下步骤进行：

设计引物：根据目标基因的序列，设计引物用于扩增启动子区域。引物应包含与目标启动子序列互补的片段。 

DNA提取：从目标生物体的基因组DNA中提取目标基因的DNA。可以使用商业DNA提取试剂盒或自行制备。 

PCR扩增：使用设计好的引物进行PCR扩增，将目标基因的启动子扩增出来。反应体系中需要包含DNA模板、引物、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）、聚合酶和缓冲液。 

凝胶电泳：将PCR产物与DNA分子量标记物一同进行凝胶电泳，以确认目标启动子的扩增成功与否。 

PCR产物纯化：使用商业净化试剂盒，将PCR产物纯化，去除杂质。 

克隆：将纯化后的PCR产物连接到适当的载体上，如质粒或噬菌体。可以使用限制性内切酶和DNA连接酶来进行连接。 

转化宿主细胞：将连接好的载体转化到宿主细胞中，如大肠杆菌。可以使用热激转化或电转化等方法。 

筛选：在含有适当选择抗生素的培养基上培养转化后的细胞，筛选出带有目标启动子的克隆。 

验证：通过测序方法验证克隆是否成功，同时也需要进行进一步的功能鉴定和分析。

1. 利用启动子探针载体筛选启动子
2. 利用PCR技术克隆启动子
3. 环状PCR
4. 利用载体或接头的染色体步行技术克隆基因启动子

根据发表的基因组序列，找基因ATG前2000bp，设计引物，使用物种基因组DNA为模板，PCR

可以利用启动子探针载体克隆启动子

具体的过程为

先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告基因的上游位置；随后再把重组混合物转化给寄主细胞，构建质粒载体基因文库，并检测报告基因的表达活性。

可以利用PCR技术克隆启动子。

克隆一个已知基因的启动子：

首先,你需要自己做一个genomic walking的模板（基本原理为：抽提该物种的DNA,DNA的质量必须保证无杂质,纯度、浓度高；根据物种的不同,分别用3-5种限制性内切酶酶切DNA,酶切过后加相应的接头,平末端链接,这样一套模板就算完成）；

设计引物,在目的基因的5‘UTR设计一对往上游扩增的槽式引物（GC含量、Tm值尽量高,66度往上）；

PCR克隆,根据自己合成的槽式引物和genomic walking的模板末端加上的接头序列,PCR（一般都是用Touch DownPCR,根据槽式引物,扩增两轮,第二轮是以第一轮的PCR产物为模板）；

点样检测,挖胶回收特异的条带；

TA克隆,选择阳性克隆测序.

一般启动子的长度超过1K就可以了.一次长度不够,可以根据测出来的序列再次设计引物往上游扩增.

利用PCR技术克隆启动子即根据发表的基因序列，设计引物，克隆基因的启动子，由于PCR法简便快捷，近年来人们较多采用此方法克隆基因启动子。

将基因的启动子区域克隆下来的基本步骤如下:

1. 提取包含目标基因及其启动子区域的基因组DNA。

2. 根据目标基因的序列,设计启动子区域上的引物。需要考虑启动子长度,通常200-1000bp。

3. 用设计的引物进行PCR扩增目标启动子序列。

4. 将PCR产物进行凝胶电泳检验,提取目标条带。

5. 将提取的启动子片段与载体质粒进行连接反应。常用的载体质粒有pMD18-T简单克隆载体等。

6. 将连有启动子的重组载体转化入大肠杆菌等受体细胞。

7. 通过蓝白筛选、PCR或测序鉴定提取所得重组克隆。

8. 得到正确的重组载体后,可大量扩增提取启动子插入片段。

9. 最后可进行启动子的功能验证,如驱动报告基因表达等。

通过这样的分子克隆流程,就可以从基因组中准确获得启动子序列并进行保存、扩增和功能分析。需要注意引物设计、目标条带切胶提纯等关键步骤。

可以利用启动子探针筛选启动子进行克隆