细胞培养的生长过程有哪些阶段？

细胞培养的生长过程通常可以分为以下几个阶段:

1. Latent phase / Lag period 潜伏期

这是细胞接触新环境后,准备适应环境的阶段。细胞会发生一些生理生化改变,但不会有明显的增殖。

2. Log phase 对数增长期

细胞开始快速增殖和分裂,呈指数增长。这时细胞群体数量以指数级增加。

3. Stationary phase 稳态期

当营养消耗和代谢废物堆积时,细胞增殖会放缓。细胞数量达到峰值并保持相对恒定。

4. Decline phase 衰亡期

营养继续耗尽,代谢废物堆积,细胞开始衰亡和死亡。活细胞数目会逐渐下降。

5. Death phase 死亡期

细胞严重老化和大量死亡,存活细胞数量极少。如果不传代培养,细胞会完全死亡。

不同类型的细胞其生长曲线的详细情况会有所不同,但大体的生长过程分期是类似的。

进行正常体外细胞培养时，在细胞全生存过程中，大致都经历以下三个阶段：

　　(一)原代培养期

　　原代培养也称初代培养．即从体内取出组织接种培养到传代阶段，一般持续1～4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质，也即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性细。如把这种细胞群稀释分散成单细胞，在软琼脂培养基中进行培养时，克隆形成率很低，即细胞独立生存性差。克隆形成率即细胞群被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群克隆的百分数。由于原代培养细胞分裂次数还不多，细胞之间发生相互影响尤其是可能导致细胞性状发生改变的影响还不大．细胞的结构和功能与体内很相似，故原代培养的细胞接近体内时的情况。

　　原代培养期细胞的主要生长生物学行为包括黏附与贴壁、铺展、细胞运动、细胞分裂几个方面。

　　(二)传代期

　　在培养细胞全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系(diploid cell line)。为保持二倍体细胞性质，应在初代培养期或传代后早期冻存。当前世界上常用细胞均在不出十代内冻存。如不冻存，则需反复传代以维持细胞的适宜密度，以利于生存，这就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下传代30～50次后，细胞增殖逐渐缓慢，以至停止，细胞进入衰退期。

　　所有体外培养细胞，包括初代培养及各种细胞系，当生长达到一定密度后，都需做传代处理。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、细胞基数大、相同增殖速度条件下，细胞数量增加与饱和速度相对要快(实际上细胞接种数量大时细胞增殖速度比时要快)。连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增殖快，培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。

　　(三)衰退期

　　培养细胞经过一定次数的传代后，细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，细胞很难长满培养空间，最后衰退凋亡。相差显微镜观察此期细胞可见细胞轮廓增强，色泽变暗，胞质内出现暗的颗粒样结构以及空泡状结构，胞质突起回缩，突起边缘有时可脱落。衰退期不同于前面讲到的停滞期，处于停滞期的细胞可以通过传代进行挽救，而处于衰退期的细胞以任何方法都不能挽救，结局只能是退化、死亡。

进行正常细胞培养时,不论细胞的种类和供体的年龄如何,细胞系的生长过程都经历原代

培养期、传代培养期和衰退期(或永生化)三个阶段。

培养细胞生长过程：潜伏期→指数增生期→停滞期

一、潜伏期(latent phase)：

细胞接种后,先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期.此时,细胞质回缩, 胞体呈圆球形.然后细胞贴附于载体表面,称贴壁,悬浮期结束. 细胞贴壁速度与细胞种类,培养基成分,载体的理化性质等密切相关。一般情况下，原代培养细胞贴壁速度慢,可达10-24 小时或更多, 而传代细胞系贴壁速度快, 通常10-30 分钟即可贴壁。细胞贴壁后还需经过一个潜伏阶段，才进入生长和增殖期.原代培养细胞潜伏期，约24-96 小时或更长, 连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅需6-24 小时。

二、指数增生期(logarithmic growth phase)

这是细胞增殖最旺盛的阶段，分裂相细胞增多。指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志。通常以细胞分裂相指数（Mitotic index, MI）表示，即细胞群中每1000 个细胞中的分裂相数。一般细胞的分裂指数介于0.1%-0.5%，原

原代细胞分裂指数较低，而连续细胞和肿瘤细胞分裂相指数可高达3%－5%。

三、停滞期(Stagnate phase)

细胞数量达到饱和密度后，如不及时进行传代，细胞就会停止增殖，进入停止期。此时细胞数持平，故也称平台期（Plateau phase）。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动。如不进行分离传代，细胞会因培养液中营养耗尽、代谢产物积聚、pH 下降等因素中毒，出现形态改变，贴壁细胞会脱落，严重的会发生死亡，因此，应及时传代。

贴壁，快速分裂生长，细胞密度增大后，细胞分裂变缓，维持生长