请问，treg细胞和nk细胞怎么培养？

Treg细胞培养注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分标本需添加抑肽酶。

NK细胞培养存在两种培养方式：

1、滋养层细胞（人肿瘤细胞，即人白血病K562细胞）培养方式。

首先获得具有不分裂不增殖但仍保持代谢活性的滋养层细胞。该细胞通过基因工程技术进行改造，再经过钴60辐照，细胞膜表面稳定表达多种细胞因子，在多种细胞因子协同作用下，外周血单个核细胞中的自然杀伤细胞得到定向激活和扩增。

该种培养方式的价格相对便宜，仅有3000元左右。从培养结果来看，细胞收获量可达到20亿/L的水平，NK表型阳性率达到80%-90%左右。

2、纯因子细胞培养方式。

顾名思义就是使用相应的细胞因子来刺激单个核细胞，向NK细胞方向诱导，并配合相应的细胞培养基，使NK细胞大量增殖。纯因子细胞培养技术以其安全性高而著称，其原因在于所使用的细胞因子，都是体内环境原本就存在的。培养过程相当于模拟体内环境，促进NK细胞的激活及大量增殖。

Treg细胞培养的注意事项：

1. 选择适当的培养基：Treg细胞培养通常使用含有高浓度IL-2（白细胞介素-2）的培养基，如RPMI 1640。确保培养基中含有适当的营养物质和补充物。

2. 使用合适的生长因子：IL-2是Treg细胞的重要生长因子，对其生长和维持起关键作用。确保在培养过程中提供足够的IL-2，并根据需要进行补充。

3. 细胞净化和分选：Treg细胞的培养前需要进行细胞净化和分选，以确保纯度。使用合适的细胞排序技术（如流式细胞术）或特定的标记抗体来净化Treg细胞。

4. 抑制性功能检测：Treg细胞的主要功能是抑制免疫反应。在培养过程中，可能需要进行Treg细胞的抑制性功能检测，以确认其功能是否正常。

NK细胞培养的注意事项：

1. 选择适当的培养基：NK细胞培养通常使用含有IL-2和IL-15等生长因子的培养基。确保培养基中含有足够的营养物质和补充物。

2. 维持活性：NK细胞对IL-2的依赖性较高，因此在培养过程中需要提供足够的IL-2，并定期更换培养基以维持其活性。

3. 细胞源的选择：NK细胞可以从外周血、骨髓或脐带血等来源中获得。根据实验需要选择合适的细胞源，并采取相应的培养方法。

4. 环境调节：在培养NK细胞时，需要注意提供适当的环境因子，如低氧条件和合适的培养基质。这有助于模拟NK细胞在体内的生理环境。

NK细胞培养的注意事项以及培养方法：

注意事项：

1.坚持无菌操作，避免细胞污染和交叉感染。

2.细胞密度要适宜，太低可能导致细胞凋亡，太高则可能造成细胞堆积、难以吸附。

3.培养基的选择要根据实验需要进行，一般包括基础培养基、补充剂等。

4.培养条件要符合细胞生长的需求，如温度、湿度、CO2浓度、培养器等。

5.定期更换培养基，避免老化和积累有害物质。

培养方法：

1.从骨髓、外周血、脾脏等组织中分离NK细胞，并通过梯度离心、负向选择等手段纯化NK细胞。

将NK细胞悬浮于含有IL-2、IL-15等生长因子的培养基中，并将其接种于预先涂有黏附性分子的培养皿或板中。

2.按照实验需要和细胞生长情况，适时更换培养基，添加适当的生长因子和维持因子。

3.定期观察细胞生长情况，鉴定细胞纯度和生长状态。

4.使用NK细胞进行各种实验，如细胞毒活性、细胞因子分泌等。