睾丸支持细胞怎么培养？

培养基采用DMEM，1×非必需氨基酸、50μM2-巯基乙醇、2mM谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠)，10ng/mL碱性成纤维细胞生长因子2.5ng/mL表皮生长因子，100ng/mLβ-estradiol)。每日通过倒置相差显微镜下观察细胞生长情况并拍照记录，每4～5天传代一次。当皿内细胞接近80～90%融和时，胰酶消化培养细胞，按1∶2传代细胞接种于明胶预处理的培养皿中。原代培养细胞接种24h，倒置显微镜下观察到大部分细胞贴壁生长，细胞呈多角形有2～4个突起，形态不规则，贴壁牢固，数量占贴壁细胞的80%以上；少数贴壁细胞呈梭形，无突起，可能是间质细胞、成纤维细胞或管周肌样细胞。在贴壁细胞上层有贴附不牢固的圆形细胞，多为生精细胞。48h后更换培养液，吹打去除贴壁不牢的的生精细胞，可见支持细胞的胞体增大，呈荷叶状铺在培养瓶底，部分汇合成片，胞核清晰可见，胞质丰富。

睾丸支持细胞（Sertoli细胞）是一种在睾丸中起支持和调控生精细胞发育的细胞类型。它们可以通过以下步骤进行培养：

1. 提取和分离细胞：从小鼠或其他适合的模型动物的睾丸中提取细胞。这通常涉及灭菌的手术和组织分离技术。

2. 培养基准备：制备适合睾丸支持细胞的培养基。通常使用基本培养基（如DMEM）并添加必要的营养物质、生长因子和血清成分。

3. 接种和培养：将分离的睾丸支持细胞接种到含有培养基的培养皿中。细胞应该在一个适宜的环境中培养，如温度为37摄氏度、含有适当水分饱和度的培养箱中。

4. 培养条件调节：为睾丸支持细胞提供适当的培养条件，如调整培养基的pH值、温度和气体环境（通常包括含有适量二氧化碳的空气）。

5. 细胞观察和维持：观察和评估睾丸支持细胞的生长和形态特征。定期更换培养基并提供所需的营养物质和生长因子，以保持细胞的健康状态。

在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。

如果细胞已长满(达80-90%)。即可进行传代,具体步骤如下:

a,弃去培养液,用PBS洗1-2次。

b,向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培养液,轻轻吹打细胞。

c,加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养

d,传代比例:1:2-1:3