怎么样才能提取小鼠细胞 dna

操作步骤：

（1）收集小鼠细胞，PBS 漂洗3次；

（2）将细胞悬浮于500 ul的TNE缓冲液中；

（3）加入6 ul20mg/ml蛋白酶K和50ul10%SDS，轻缓摇动；

（4）37℃保存1-4小时；

（5）加入等体积250ul饱和酚和氯仿，轻摇15-20分钟，1200rpm离心5分钟，用大口径吸管转移上清；

（6）用2倍体积的乙醇（室温），轻摇至DNA出现；

（7）12000rpm离心10 min，20ul TE溶解。

细胞DNA 的提取

　　① 取细胞10x7左右

　　② 加 10 倍体积 TE 缓冲液，用玻璃匀浆器在冰浴中中速匀浆，并将匀浆液转入 10ml 离心管以 4000rpm 离心 10 分钟，弃上清

　　③ 加 10 倍体积 TE 洗一遍，以 4000rpm 离心 10 分钟，弃上清，加适量 TE 稀释

　　④ 取 400µl 稀释液于 1.5ml 的 Eppendorf 管，缓慢加入 10 %SDS 溶液，至终浓度 0.5 % ( 加 20µl) ，摇匀直至溶液变粘稠

　　⑤ 加入 Rnase(200µg/ml) 至终浓度 20ug/ml(42µl) 混匀，置 37 ℃保温 60 分钟总体积 (420µl) 。

　　⑥ 加蛋白酶 K(20mg/ml) 至终浓度 100ug/ml混匀 ( 加 21ul) ，于 50 ℃保温 3 小时，并间歇搅动 ( 总体积 441µl) 。

　　⑦ 将此溶液冷却至室温，加等体积饱和酚抽提，以 10000rpm 离心 10 分钟；取上清加 1/2 体积饱和酚， 1/2 体积氯仿/异戊醇抽提一次，以 10000rpm 离心 10 分钟；取上清，加等体积氯仿/异戊醇抽提一次，以 10000rpm 离心 10 分钟

　　⑧ 加 1/10 体积 5MKAc ，加 2 倍体积无水乙醇充分混匀，以 12000rpm 离心 10 分钟

　　⑨ 加 1ml70 %乙醇洗沉淀，以 12000rpm 离心 10 分钟， 待酒精挥发尽后加 20ul TE 溶解， 4 ℃储存

要提取小鼠细胞的DNA，您可以按照以下步骤进行操作：

1. 细胞收获：从培养皿中收获小鼠细胞。使用适当的方法（如细胞解离液或胰蛋白酶/EDTA溶液）将细胞从培养皿中分离出来。

2. 细胞洗涤：将细胞转移到离心管中，并使用缓冲液（如PBS）洗涤细胞，去除培养基和细胞碎片。

3. 细胞裂解：加入细胞裂解缓冲液（如细胞裂解缓冲液或含有蛋白酶K的缓冲液），使细胞溶解并释放DNA。轻轻颠倒离心管以充分混合。

4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K（或其他适当的蛋白酶），并在适当的温度下孵育一段时间，以消化细胞内的蛋白质。这样可以帮助纯化DNA并去除蛋白质污染。

5. DNA沉淀：加入等体积的异丙醇或酒精，使DNA沉淀。用离心将混合液离心，以使DNA沉积在离心管底部。倒掉上清液，并轻轻用70%乙醇洗涤DNA沉淀。

6. DNA溶解：将DNA沉淀空干后，加入适量的DNA溶解缓冲液（如TE缓冲液）进行溶解。使用温和的温度和时间条件来帮助DNA溶解。

7. DNA纯化：您可以使用商业化的DNA纯化试剂盒，按照说明书中的步骤进行进一步的DNA纯化，以去除残余的蛋白质、RNA和其他污染物。