如何用台盼兰计数活细胞？

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。

以下是基本的步骤：

1. 准备细胞悬液：收集你要计数的细胞，使其成为一个细胞悬液。

2. 取一个小管（比如Eppendorf管），将细胞悬液加入管中。

3. 添加台盼兰染色剂：使用移液器向细胞悬液中滴加台盼兰染色剂，通常比例为1:1。混匀悬液，确保染色剂均匀分布。

4. 填充台盼兰计数室：使用移液器吸取一部分染色的细胞悬液，轻轻填充台盼兰计数室（例如海曼计数室）的两个相邻室室隙。

5. 观察计数：使用显微镜观察计数室中的细胞。台盼兰染色后的死细胞会吸收染色剂并呈现蓝色，而活细胞则保持无色。

6. 计数细胞：在计数室的方格中，计算蓝色（死细胞）和无色（活细胞）的细胞数目。通常使用一个特定的计数网格来帮助计数。

请注意，活细胞计数是一种相对的方法，因为台盼兰染色也可能对细胞产生一定的影响。此外，确保在计数前尽快完成染色和观察，以避免细胞在台盼兰染色剂中过度曝露而引起不准确的计数结果。

将样品适当稀释后，用稀释后的样品和0.4％的台盼兰溶液按1:1混合后，用移液枪点样到血球计数板，置于倒置显微镜下观察、计数，其中蓝色细胞是死细胞，因活细胞排斥台盼兰，不被染色。

镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%