用胰酶消化贴壁细胞，发现很难消化下来，该怎么办？

排除细胞状态不好的原因，可以考虑换下胰酶试试看

一、trypsin本身，胰酶没有在冰箱中放置。或者没有加入EDTA会影响其消化效果的。

二、增加消化时间，提高trypsin 浓度。undefined,undefined的trypsin本身对细胞伤害不大。至少对cho细胞，暴露在undefinedtrypsin溶液中，近一个小时，细胞活性没有显著下降的。所以，可以提高trypsin浓度为undefined,或者消化时间延长些。

三、小tricks，消化的时候，轻轻拍打方形瓶底部，或者在37摄氏度放置几分钟，都可以提高消化效果。

另外，贴壁细胞不好消化，本身是好事。说明细胞长得很壮。下次传代的时候，可以少留一些。覆盖率长到90%消化就可以，不一定非要等到长满。

难消化的话可以增加胰酶的浓度，或在胰酶内加入edta辅助消化

有几种解决方法：

1. 增加胰酶浓度：尝试增加胰酶的浓度来增强消化能力。可以逐渐增加胰酶的浓度，然后进行适当的消化时间，以观察是否可以更有效地消化贴壁细胞。

2. 延长消化时间：如果胰酶的浓度已经足够高，可以尝试延长消化的时间。有些细胞类型的表面附着物质可能较难消化，需要更长的时间来获得较好的消化效果。试验过程中要注意不要超过细胞的最大耐受时间。

3. 添加细胞分散剂：如果胰酶仍然无法有效消化贴壁细胞，可以尝试添加适量的细胞分散剂，如Trypsin-EDTA（胰蛋白酶-EDTA）或Accutase等。这些分散剂具有更强的细胞分散能力，有助于将贴壁细胞从培养基底上分离下来。

4. 优化细胞处理条件：除了胰酶消化条件的调整，还可以考虑优化其他细胞处理条件，如细胞培养基的配方、温度、pH值等。某些细胞可能对特定条件更敏感，对消化的效果也会有影响。

5. 尝试其他方法：如果使用胰酶或细胞分散剂仍然无法有效消化贴壁细胞，可以尝试其他细胞分离或解聚的方法，如机械刮取、离心沉淀、胶体溶解酶等。这些方法可能对特定细胞类型或实验条件更适用。