细胞消化不下来

丁香园网友freett的问题为：

我是新手，第一次培养细胞，按照师姐的配方配了0.05%EDTA－trypsin,但发现消化了十五分钟后，细胞还是基本上全贴在瓶壁上，请问各位高手，这可能是什么原因？

丁香园网友重剑无锋的观点为：

1、最有可能是你的培养液没有去除干净，因为培养液可以中止消化。所以建议用PBS冲洗两次。然后再加EDTA.

2、加大EDTA的浓度 ，可以选择0.1％与trypsin混合使用，加大以上溶液的体积，可以用2ml。

3、37度温度要够。

4、实时查看，当看到镜下细胞折光度有改变，就是有作用，然后用培养液将细胞冲洗下来。

丁香园网友cherrypie的问题为：

现在我发现胰酶消化不下细胞，0.25%胰酶，我在培养箱里孵育了5min，竟然还贴壁贴的很好，实在没办法了。请各位高手帮帮忙吧，我怕消化时间长了对细胞有伤害，所以只能放弃消化，就吹打，可是大部分是吹不下来的。

丁香园网友xinglinzi的观点为：

1、用冰D-Hank's液洗细胞两次；

2、用刚解冻的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培养瓶，开过口的和时间长的都不用。

我遇到过的情况和你的一样，37度孵育的消化不动细胞，原因我也不清楚。用马上解冻的效果特别好，1-2分钟就可以了。我做的是A549细胞。