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胰腺癌细胞培养问题求助?

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心细北方

一个同事养的胰腺癌细胞,平时贴壁很好,但是转cas-9之后就不贴壁了。10cm板子里面大概10ug DNA,用的opti-MEM溶的LP3000。然后上流式,96孔板到24孔板就不贴壁了。求助下!

 

 

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3 个回答

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huarenqiang5

有帮助

可能是培养基浓度问题,建议提高浓度试试看。

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loveliufudan

有帮助

以下是一些建议来解决这个问题:

1. 转染试剂和DNA比例:确保您在转染时使用适当的转染试剂和DNA比例。如果DNA过量,可能会导致细胞对转染试剂的毒性反应,影响细胞的贴壁能力。请参考转染试剂和DNA的使用说明书,遵循推荐的比例。

2. 转染时间和条件:转染时间和条件对于细胞的贴壁能力也很重要。确保您在转染后适当的时间内进行培养,给细胞恢复和附着的时间。此外,控制培养基的组成和条件,如温度、CO2浓度等,以最大程度地促进细胞贴壁。

3. 细胞密度和孵育时间:在进行转染之前,确保细胞密度适当。过高或过低的细胞密度可能会影响细胞贴壁能力。此外,检查细胞在孵育过程中的孵育时间。过长的孵育时间可能导致细胞过度生长,降低贴壁能力。

4. 培养基选择:考虑使用适合胰腺癌细胞的培养基。胰腺癌细胞可能对不同的培养基和血清成分有不同的响应。尝试使用其他培养基,可能有助于提高细胞的贴壁能力。

5. 检查细胞状态和健康:在转染后,细胞状态和健康可能会受到影响。确保细胞没有受到细菌或真菌感染,并检查细胞是否处于正常的形态和生长状态。如果细胞出现异常,可能需要重新培养新的细胞株。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以适当添加血清,因为血清中含有促贴壁因子,而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子,细胞的贴壁效果会下降很多

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