质粒用DH5a热激转化后得到这样的菌落

是正常现象，密是因为转化后涂板用的菌浓度太大，稀释后，即可得到单菌落。

可能有以下2个原因：

①稀释的倍数不够，菌液含菌量过高；

②涂布时划线过于密集，导致菌落生长空间狭小。

转化时有杂菌污染，同时涂平板时菌总量太多

可能有下面几个原因：

1. 转化效率高：DH5α细胞系对于转化非常敏感，如果使用的质粒DNA浓度高，可能导致大量的菌落形成。

2. 抗生素浓度：选择性抗生素（如Ampicillin，Kanamycin等）的浓度过低可能导致大量的非选择性生长，导致菌落看起来非常多并且密集。

3. 板的大小和浓度：LB琼脂板的大小和浓度也可能影响菌落的生长。板太大或浓度过高可能导致菌落过密。

4. 孵化时间过长：如果孵化时间过长，菌落可能会变得过于密集。

过表达转染后，WB检测到有显著的蛋白表达，说明质粒DNA在宿主细胞中成功表达。然而，如果菌落太密，可能会影响单克隆的选择和纯化。你可以试着调整转化后接种的细胞数，或者增加抗生素的浓度，或者缩短孵化时间，看看是否能改善这个问题。

蛋白显著表达就行，不用过多关注菌落密不密